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用DNS法总测不出酶活 已有2人参与
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我用的是以CMC-Na为底物的液体发酵培养基。取发酵液，10000转左右离心5分钟作为粗酶液。0.5ml粗酶液+1.5mlPH4.8的乙酸乙酸钠缓冲溶液，反应时间1h，温度50度。对照是粗酶液沸水浴五分钟。最后DNS1.5ml，沸水浴五分钟。540nm测吸光度，结果几乎为零，还会出现负值。DNS做标线也没出现问题。求指导 发自小木虫IOS客户端 |
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我目的是筛选出纤维素降解菌，我取的牛粪作为样品，厌氧培养，以滤纸为底物液体富集培养，然后在CMC为碳源的CMC上涂布分离纯化，可能我厌氧条件达不到，晒出来的菌菌种鉴定的属为好氧的。我现在在测酶活考虑要不要用这株菌做后续实验。我拿以滤纸或微晶纤维素为底物的液体发酵液测液相，只有纤维二糖，没有检测到葡萄糖，纤维二糖含量还算高，5g/l的底物发酵液纤维二糖含量有不到4g/l（但降解的现象并没有很明显，这点我超级郁闷，不懂到底为什么，按说底物降解不明显二糖含量不该这么高）。现在测酶活，测酶活的体系为：0.5ml粗酶液+0.5%cmc（用0.5gCMC溶在ph4.8的乙酸乙酸钠缓冲液中）反应30min，之后加DNS1.5ml，沸水浴5min，冷却，加蒸馏水至25ml，540nm测吸光度。 发自小木虫IOS客户端 |
15楼2017-06-08 21:37:05
2楼2017-05-23 11:37:15
3楼2017-05-23 16:48:15
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我是用滤纸为底物筛出来的降解菌。测酶活时分别用CMC和滤纸为底物，测CMC酶活和滤纸酶活。测出来几乎为零。还有一个问题，我如果在做空白组时，加入DNS后再加粗酶液理论上可行吗？我这样试了下空白的颜色不那么深了，结果能提高点。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-05-23 23:48:59