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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 用DNS法总测不出酶活
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t朵朵

新虫 (小有名气)

[求助] 用DNS法总测不出酶活 已有2人参与

我用的是以CMC-Na为底物的液体发酵培养基。取发酵液，10000转左右离心5分钟作为粗酶液。0.5ml粗酶液+1.5mlPH4.8的乙酸乙酸钠缓冲溶液，反应时间1h，温度50度。对照是粗酶液沸水浴五分钟。最后DNS1.5ml，沸水浴五分钟。540nm测吸光度，结果几乎为零，还会出现负值。DNS做标线也没出现问题。求指导

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1楼 2017-05-23 00:19:23
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t朵朵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小花木兰 at 2017-05-23 16:48:15
反应底物是什么，没有加合适的底物当然测不到酶活，你的底物可能不是发酵液中酶特定的底物，专一性强，

我是用滤纸为底物筛出来的降解菌。测酶活时分别用CMC和滤纸为底物，测CMC酶活和滤纸酶活。测出来几乎为零。还有一个问题，我如果在做空白组时，加入DNS后再加粗酶液理论上可行吗？我这样试了下空白的颜色不那么深了，结果能提高点。

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4楼2017-05-23 23:48:59
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t朵朵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18004518909 at 2017-06-01 00:22:34
可是你描述的方法里就没提加入底物的事啊。CMC加了多少，还有，滤纸也能当底物，我这是第一次听说。

测CMC酶活底物加的0.5%的CMC，测滤纸酶活加的50mg的滤纸

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7楼2017-06-05 22:55:14
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t朵朵

新虫 (小有名气)
求指导

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2楼2017-05-23 11:37:15
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
反应底物是什么，没有加合适的底物当然测不到酶活，你的底物可能不是发酵液中酶特定的底物，专一性强，
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3楼2017-05-23 16:48:15
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t朵朵

新虫 (小有名气)
求指导

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5楼2017-05-31 22:43:58
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18004518909

新虫 (小有名气)
可是你描述的方法里就没提加入底物的事啊。CMC加了多少，还有，滤纸也能当底物，我这是第一次听说。

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6楼2017-06-01 00:22:34
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julia0708

木虫 (正式写手)
酶液浓度是不是太低了

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8楼2017-06-06 07:23:56
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考研行者

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

t朵朵
9楼2017-06-06 13:51:16
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t朵朵

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 考研行者 at 2017-06-06 13:51:16
野生菌直接用发酵液测多糖类酶活是基本测不出来的，必须要浓缩或者纯化一下

请问怎么浓缩？确实是野生菌，发酵液用液相可以测出来有纤维二糖等生成，这说明有酶解

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10楼2017-06-06 23:40:17
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