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t朵朵

新虫 (小有名气)

[求助] 用DNS法总测不出酶活 已有2人参与

我用的是以CMC-Na为底物的液体发酵培养基。取发酵液,10000转左右离心5分钟作为粗酶液。0.5ml粗酶液+1.5mlPH4.8的乙酸乙酸钠缓冲溶液,反应时间1h,温度50度。对照是粗酶液沸水浴五分钟。最后DNS1.5ml,沸水浴五分钟。540nm测吸光度,结果几乎为零,还会出现负值。DNS做标线也没出现问题。求指导

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t朵朵

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小花木兰 at 2017-05-23 16:48:15
反应底物是什么,没有加合适的底物当然测不到酶活,你的底物可能不是发酵液中酶特定的底物,专一性强,

我是用滤纸为底物筛出来的降解菌。测酶活时分别用CMC和滤纸为底物,测CMC酶活和滤纸酶活。测出来几乎为零。还有一个问题,我如果在做空白组时,加入DNS后再加粗酶液理论上可行吗?我这样试了下空白的颜色不那么深了,结果能提高点。

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4楼2017-05-23 23:48:59
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t朵朵

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18004518909 at 2017-06-01 00:22:34
可是你描述的方法里就没提加入底物的事啊。CMC加了多少,还有,滤纸也能当底物,我这是第一次听说。

测CMC酶活底物加的0.5%的CMC,测滤纸酶活加的50mg的滤纸

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7楼2017-06-05 22:55:14
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t朵朵

新虫 (小有名气)

2楼2017-05-23 11:37:15
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反应底物是什么,没有加合适的底物当然测不到酶活,你的底物可能不是发酵液中酶特定的底物,专一性强,
3楼2017-05-23 16:48:15
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t朵朵

新虫 (小有名气)

5楼2017-05-31 22:43:58
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18004518909

新虫 (小有名气)

可是你描述的方法里就没提加入底物的事啊。CMC加了多少,还有,滤纸也能当底物,我这是第一次听说。

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6楼2017-06-01 00:22:34
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julia0708

木虫 (正式写手)

8楼2017-06-06 07:23:56
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考研行者

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-06-06 13:51:16
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t朵朵

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 考研行者 at 2017-06-06 13:51:16
野生菌直接用发酵液测多糖类酶活是基本测不出来的,必须要浓缩或者纯化一下

请问怎么浓缩?确实是野生菌,发酵液用液相可以测出来有纤维二糖等生成,这说明有酶解

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10楼2017-06-06 23:40:17
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