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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 用DNS法总测不出酶活
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考研行者

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
11楼2017-06-07 09:20:21
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考研行者

禁虫 (小有名气)
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12楼2017-06-07 09:21:31
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Only菱花

禁虫 (正式写手)
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13楼2017-06-08 08:50:49
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t朵朵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 考研行者 at 2017-06-07 09:21:31
浓缩的话可以冻干，然后再复溶，这样离子干扰比较多可能会影响测量结果

好的，谢谢

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14楼2017-06-08 21:20:54
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t朵朵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Only菱花 at 2017-06-08 08:50:49
实验略显粗糙，可否解释详细点，首先明确实验目的再设计反应体系

我目的是筛选出纤维素降解菌，我取的牛粪作为样品，厌氧培养，以滤纸为底物液体富集培养，然后在CMC为碳源的CMC上涂布分离纯化，可能我厌氧条件达不到，晒出来的菌菌种鉴定的属为好氧的。我现在在测酶活考虑要不要用这株菌做后续实验。我拿以滤纸或微晶纤维素为底物的液体发酵液测液相，只有纤维二糖，没有检测到葡萄糖，纤维二糖含量还算高，5g/l的底物发酵液纤维二糖含量有不到4g/l（但降解的现象并没有很明显，这点我超级郁闷，不懂到底为什么，按说底物降解不明显二糖含量不该这么高）。现在测酶活，测酶活的体系为：0.5ml粗酶液+0.5%cmc（用0.5gCMC溶在ph4.8的乙酸乙酸钠缓冲液中）反应30min，之后加DNS1.5ml，沸水浴5min，冷却，加蒸馏水至25ml，540nm测吸光度。

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15楼2017-06-08 21:37:05
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我在风中闲逛

铁虫 (正式写手)
标准曲线做了么？DNS试剂没问题吧？

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16楼2017-06-09 05:41:07
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2511956298

铜虫 (初入文坛)
试过直接用发酵液试试没？离心后的上清和沉淀各试一次看看嘛
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17楼2017-06-09 10:53:39
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t朵朵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 我在风中闲逛 at 2017-06-09 05:41:07
标准曲线做了么？DNS试剂没问题吧？

标线做了线性很好，DNS自己配的

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18楼2017-06-09 12:31:58
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zwengmeng

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18004518909 at 2017-06-01 00:22:34
可是你描述的方法里就没提加入底物的事啊。CMC加了多少，还有，滤纸也能当底物，我这是第一次听说。

滤纸可以用来当底物的

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19楼2017-06-23 13:38:27
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