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七分天注定

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 老师，我做的大豆基因的克隆，通过rna反转录cdna然后进行... 已有2人参与

老师，我做的大豆基因的克隆，通过rna反转录cdna然后进行扩增，引物是老师设计的，扩增后用凝脂糖琼脂电泳，出来目的条带了，然后我回收错误了，想再次扩增，就再也扩不出来了，这是什么原因呢，我用的是温度梯度退火，别的条件都没有变，求老师解答，谢谢 @biostar2009

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1楼 2017-05-22 21:16:44
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biostar2009

无虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
回收之前装样的管子还在么？捡回来，加点水，当模板继续Ｐ
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4楼2017-05-23 12:34:12
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普通回帖

cqqxmc

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是模板的原因
这个基因表达量是不是很低？在不同组织部位的表达量不同
cDNA比较娇贵，可以重新提取表达量高的组织的RNA反转录得到质量更好的cDNA试试
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2楼2017-05-23 08:47:49
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七分天注定

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
好的，谢谢老师 @biostar2009

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3楼2017-05-23 08:56:51
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二小神奇

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
cDNA可能降解了  建议用之前的RNA重新反转再扩增
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5楼2017-05-23 13:59:29
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七分天注定

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-05-23 12:34:12
回收之前装样的管子还在么？捡回来，加点水，当模板继续Ｐ

谢谢老师，这个反转录的时候需要注意什么吗，怎样能减少降解，

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6楼2017-05-23 20:57:08
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七分天注定

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-05-23 12:34:12
回收之前装样的管子还在么？捡回来，加点水，当模板继续Ｐ

那个把不同温度的回收在一起了，应该不能用了吧，我也p过，不过没p出来

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7楼2017-05-24 10:49:53
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