应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB内参不齐怎么办？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 14420  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小时静

新虫 (初入文坛)

[交流] WB内参不齐怎么办？ 已有4人参与

做了将2个月的WB，从第一次做我的所有条带都已经可以做出来了，而且每次的内参条带都不齐，目的蛋白也是看不出药效，不管是按BCA测蛋白浓度，还是按内参的灰度调整上样，或者是按照统一标准进行收样（六孔板细胞接种量一致，生长时间一致，收样时裂解细胞一致，加裂解液一样），我拿同一份样品，抛出来的内参和目的蛋白都不齐，趋势都不一样，请大侠指教！
1.上样前样品1000rpm/min，离心1min，取上清，每孔上样20ul，。
2，跑胶80v，跑过浓缩胶。换成100v跑至胶底上1cm。
3.转膜300mA，1,5h。
4.转膜结束TBST洗膜3次，5min每次，5%脱脂奶粉封闭1h，然后TBST洗去膜上多余的封闭液。抗体使用的是abcam公司的。
5.一抗均按1:10000稀释，附一抗4度过夜，
6.一抗孵育后，TBST洗膜3次，5min每次，同样方法附二抗。室温1小时
7.二抗孵育后，TBST洗3次，每次5min，TBS最后洗一遍。
8，配好ECL发光液，机器发光。
请教各位战友我的反应体系是否有问题，或者有别的原因影响我的内参如此不齐？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-05-21 12:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

subi_nur

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你后来怎么解决的，我现在遇到了跟你一模一样的问题，我们的实验条件都差不多，鬼知道我尝试了多久，快三四个月了，已在奔溃边缘
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2018-11-09 19:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

momo1943

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
什麼内参?? https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3758299/
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-05-22 13:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

F翔T

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-23 07:43:11
不齐的话可以进行定量分析，然后用目的蛋白除以内参。定量好像用image plus6

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-05-22 14:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛上的女孩

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-23 07:43:28
都不齐是怎么不齐？你的蛋白浓度多少？好不好看跟你配的胶有关系，你的体系没问题，但是我觉得转膜1.5小时有点久

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-05-22 22:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +9 超级伊昂大王 2026-03-24 10/500 2026-03-29 20:26 by 永字号
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +7 26要上岸 2026-03-28 7/350 2026-03-29 20:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +5 倾____萧 2026-03-27 6/300 2026-03-29 16:35 by 唐沐儿
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭