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求助，蛋白为何小样诱导有条带，大样纯化无目的条带？ 已有1人参与
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我的目的蛋白约67.41kDa，连接载体PET32a,酶切位点为BamHI和Hind3，扩的是基因的ORF（包括终止子） 先小样预诱导了，跑胶看出似乎有目的条带 但由于小型超声波破碎仪坏了，所以跑的样品是全菌，无法得出目的蛋白在上清还是沉淀（图1） 随后，大量诱导后取[b上清过镍柱后跑胶图如下（图2），根本没有目的条带，甚至杂蛋白也没有，请大神分析一下究竟咋了  1.png  2.png |
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2楼2017-05-19 17:09:15
【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-25 07:44:02
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-25 07:44:02
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你IPTG诱导以后 直接拿上清做的纯化吗 你看你的目的蛋白就在沉淀里 不破碎目的蛋白不出来 直接拿iptg诱导后离心的上清做纯化那肯定没有啊 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2017-05-19 17:11:53
4楼2017-05-24 15:47:44
西西sm
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5楼2017-05-24 23:19:53
西西sm
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6楼2017-05-24 23:20:26
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7楼2017-05-24 23:21:56
xinxiyuzhou
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估计你的蛋白是包涵体表达，增大体积后，蛋白表达量就很高了，更容易形成包涵体，过柱之前还是要鉴定一下的，要改进的话，降低诱导剂浓度和诱导温度，诱导的体积也要减少。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-05-25 10:18:57
9楼2017-05-25 10:35:35