| 查看: 679 | 回复: 1 | ||
machao8405木虫 (正式写手)
|
[求助]
全长克隆，我心中的痛已有1人参与
|
| 最近在做全长克隆，一直很不顺利。模板为小麦cDNA，虽然早就听说小麦异源六倍体，克隆起来很费劲，但是真正做起来，才发现果然是这样。RNA提取质量很棒，完全没有问题。然后引物设计在5’端并没有过多选择，只能在3’端终止密码子到polyA之间选择，因此下游引物至少都是设计2-3条。于是进入了漫漫扩增之路，PCR程序用了：梯度PCR（52-60每2度一个梯度）、降落+热启动PCR、巢式PCR；试剂换了三家公司不同的试剂，其中包括高GC的试剂都用过，扩增结果让我小心脏哇凉哇凉的，要么就是啥条带都没，要么就是扩出来的比marker还marker；模板里面应该是有目的基因表达的，因为用定量引物在普通PCR上试过。现在还有啥路子可以走的？请各位大虾 不吝赐教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有270人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
wusofa
金虫 (小有名气)
蛋白RNA相互作用研究
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1962.5
- 红花: 4
- 帖子: 167
- 在线: 52.5小时
- 虫号: 943933
- 注册: 2010-01-17
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2017-05-20 09:04:36