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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒酶切鉴定，载体片段变小了
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ljp7786

铜虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒酶切鉴定，载体片段变小了 已有2人参与

构建重组质粒，载体双酶切后电泳大小正确，切胶回收。目的基因片段双酶切切胶回收后与胶回收载体连接，通过PCR筛到阳性克隆后，提取阳性克隆质粒，在进行双酶切鉴定，结果总是目的基因也能酶切下来，但是载体片段变小了，而且是从10kb变成3kb，重新划线提取载体质粒酶切回收还是同一结果，实验室其他人也在这个载体上出现这个问题，百思不得其解，帮忙分析一下，谢谢！

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1楼 2017-05-18 23:32:23
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-20 22:24:13
用stbl3菌转化试试，你如果用的普通的DH5a，且如果你的质粒有重复序列，可能会发生重组现象（有些菌种中高概率）。
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ljp7786
2楼2017-05-19 07:56:49
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ljp7786

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-05-19 07:56:49
用stbl3菌转化试试，你如果用的普通的DH5a，且如果你的质粒有重复序列，可能会发生重组现象（有些菌种中高概率）。

谢谢，你的意思是重新做连接后转stbl3，是不是原始的载体质粒也要转到这个菌株长期保存？

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3楼2017-05-19 09:40:59
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljp7786 at 2017-05-19 09:40:59
谢谢，你的意思是重新做连接后转stbl3，是不是原始的载体质粒也要转到这个菌株长期保存？
...

如果你的智力的确有重复序列的话，是的！
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4楼2017-05-20 18:28:59
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未名fangfang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你找到原因了吗，最近我也出现了同样的情况
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5楼2017-10-18 21:38:34
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