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ljp7786

铜虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒酶切鉴定,载体片段变小了已有2人参与

构建重组质粒,载体双酶切后电泳大小正确,切胶回收。目的基因片段双酶切切胶回收后与胶回收载体连接,通过PCR筛到阳性克隆后,提取阳性克隆质粒,在进行双酶切鉴定,结果总是目的基因也能酶切下来,但是载体片段变小了,而且是从10kb变成3kb,重新划线提取载体质粒酶切回收还是同一结果,实验室其他人也在这个载体上出现这个问题,百思不得其解,帮忙分析一下,谢谢!

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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ljp7786 at 2017-05-19 09:40:59
谢谢,你的意思是重新做连接后转stbl3,是不是原始的载体质粒也要转到这个菌株长期保存?
...

如果你的智力的确有重复序列的话,是的!
4楼2017-05-20 18:28:59
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-20 22:24:13
用stbl3菌转化试试,你如果用的普通的DH5a,且如果你的质粒有重复序列,可能会发生重组现象(有些菌种中高概率)。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-05-19 07:56:49
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ljp7786

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-05-19 07:56:49
用stbl3菌转化试试,你如果用的普通的DH5a,且如果你的质粒有重复序列,可能会发生重组现象(有些菌种中高概率)。

谢谢,你的意思是重新做连接后转stbl3,是不是原始的载体质粒也要转到这个菌株长期保存?

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3楼2017-05-19 09:40:59
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未名fangfang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你找到原因了吗,最近我也出现了同样的情况
5楼2017-10-18 21:38:34
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