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求助克隆何表达
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我在做大肠杆菌的一个双调控基因的蛋白表达，用的是大肠杆菌的一个高表达的菌株的质粒(32a的，氨苄抗性），酶切以后做载体（而不是PET32a）。 双酶切验证也切开了，位置也对（1600+bp），转入BL21也表达，但是表达的分子量大约在55K左右（BSA，67Kb的下方），而它本身的分子量应该在80Kb的位置（分子量是已经加过20Kb的）。请问为什么会出现这种状况？解决办法是什么？ PS：师姐说让我重新PCR，提高退火温度（我以前的退火是55度）。请教其他办法。还有，换PET28a的载体有必要么？ |
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