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balalalabala

新虫 (小有名气)

[交流] crispr/cas9敲除载体构建 已有2人参与

实验室目前有pCAS9 42876 这个质粒,之前有按照PROTOCOL做,但是载体构建一直没成功,求助其中可能出现什么问题
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balalalabala

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 指甲刀小魔 at 2017-05-15 14:56:13
哪里有问题 你没有上图

就是一直连不上,抗性筛选板上什么都没有,
3楼2017-05-15 16:47:24
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
哪里有问题 你没有上图

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-05-15 14:56:13
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54zhongling

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
能发一份protocol吗?

发自小木虫Android客户端
4楼2017-05-15 23:54:16
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balalalabala

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 54zhongling at 2017-05-15 23:54:16
能发一份protocol吗?

protocol就是 addgene  pCAS9 42876 的Protocol   
退火是放在沸水浴10分钟后自然冷却至室温;
磷酸化30分钟后放在16度做连接反应;
不过T4PNK 和buffer用的takara的。
5楼2017-05-16 11:09:10
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