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中国学者报道TALEN介导的猕猴和食蟹猴的基因敲除
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中国学者报道TALEN介导的猕猴和食蟹猴的基因敲除 云南省灵长类生物医学重点实验室和同济大学医学院等研究人员利用TALEN技术在猕猴和食蟹猴中成功敲除与引起Rett综合症相关的MECP2基因，MECP2突变率在40%-50%。此研究最终获得了一只MECP2突变的雌性猴，现已在成长中。此外，还有3个MECP2突变的雄性猴胚胎在妊娠中期夭折，经分析，这一雄性胚胎致死性与人类的男性Rett综合症胚胎致死性特点相符合。因此，在非人类灵长类动物中TALEN介导的突变可作为一种有效的研究人类疾病的基因建模工具。该研究成果发表在近日的《Cell stem cell》杂志上。 Rett综合症（Rett syndrome）是一种主要影响儿童精神运动发育的神经系统疾病，通常好发于小女孩。患有Rett综合症的人类在6到18个月表现正常，随后病童会呈现失去语言能力和运动技巧，手部重复运动、阵发喘气、动作控制失常等现象。X染色体上的MECP2基因突变是这一疾病的病因。目前没有治愈Rett综合症的方法。 过去科学家们只能通过病毒介导得到转基因猴，而现在TALEN技术为疾病模式的研究提供了新的科研工具。研究人员针对猴MECP2设计了3对TALEN，再将这3对TALEN同时显微注射入受精卵中，检测突变情况，同时发现除打靶位点外，基因组其他位置不存在任何突变。现在得到的一只出生已携带MECP2基因突变的雌性食蟹猴，虽然到到目前为止还未在这个雌性猴身上观察到行为的异常，但是根据人类Rett综合症症状的显现时间，检测这一异常的表现可能还需要一段时间。伴随着这次研究的成功，再次证实TALEN技术可作为非人类灵长类动物模型建立的有效工具。 TALEN技术是一项崭新的分子生物学工具，利用TALE序列模块，可以针对任意核酸靶序列构建TALEN质粒，在特异的靶位点上实现DNA水平的定点敲除、敲入和microRNA、lncRNA的敲除等基因修饰。TALEN技术具有打靶效率高、成本低等特点，尤其是在新一代的FastTALE技术出现之后，使得TALEN质粒的构建在1天内就可完成，操作简单方便。除了TALEN技术以外，CRISPR/Cas9技术也是当前很多研究者关注的对象。众所周知，CRISPR/Cas9存在的脱靶问题一直是学术界无法逾越的鸿沟。之前有些研究者虽然知道CRISPR/Cas9有无法避免的脱靶现象却仍在使用此技术，主要是认为CRISPR/Cas9质粒的构建简单。现在FastTALE技术的出现使得TALEN质粒的构建比CRISPR/Cas9的质粒构建还简单容易。CRISPR/Cas9构建质粒时需要分别酶切载体和DNA片段，再进行胶回收、连接等操作步骤，而FastTALE在构建质粒时只需要将模块、载体和溶液加在同一管中，通过一步法连接即可完成，不需要酶切、胶回收，故FastTALE操作简单容易，是科研人员研究基因功能的必备工具。 |
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