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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr/cas9敲除载体构建
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balalalabala

新虫 (小有名气)

[交流] crispr/cas9敲除载体构建 已有2人参与

实验室目前有pCAS9 42876 这个质粒，之前有按照PROTOCOL做，但是载体构建一直没成功，求助其中可能出现什么问题
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1楼 2017-05-15 12:18:36
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哪里有问题 你没有上图

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-05-15 14:56:13
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balalalabala

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 指甲刀小魔 at 2017-05-15 14:56:13
哪里有问题 你没有上图

就是一直连不上，抗性筛选板上什么都没有，
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3楼2017-05-15 16:47:24
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54zhongling

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能发一份protocol吗？

发自小木虫Android客户端
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4楼2017-05-15 23:54:16
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balalalabala

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 54zhongling at 2017-05-15 23:54:16
能发一份protocol吗？

protocol就是 addgene  pCAS9 42876 的Protocol   
退火是放在沸水浴10分钟后自然冷却至室温；
磷酸化30分钟后放在16度做连接反应；
不过T4PNK 和buffer用的takara的。
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5楼2017-05-16 11:09:10
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