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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA电泳需要回收100bp的片段 每次都找不到条带
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)

[求助] DNA电泳需要回收100bp的片段 每次都找不到条带 已有1人参与

一个质粒（只由目的片段与载体骨架组成），需要回收的片段只有100多bp，两边有二型酶切位点BsaI，载体骨架就是pMD19T simple 。骨架全长2.6k，骨架上也有一个BsaI位点，在骨架正中间的位置，所以用BsaI切，会产生两个1.3k和一个100多bp的目标条带。但酶切后用500bp的marker，胶浓度1% 2% 3%都试了，就是只能跑出1.3k的条带，目标条带太小没有办法显示回收 怎么办啊 求助

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-05-14 01:05:53
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HappyKuan

银虫 (小有名气)
酶切的量够不够，50ul酶切5ug质粒再跑胶试试

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2楼2017-05-16 07:43:11
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-17 07:43:29
片段太小了，酶切之后不太容易看见，你可以将质粒进行单酶切，然后pcr回收
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···
3楼2017-05-16 08:42:28
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by 指甲刀小魔 at 2017-05-16 23:38:41
两边的酶切位点是一样的
...

那就不要酶切了，直接p

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···
6楼2017-05-16 23:43:38
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张自生

新虫 (初入文坛)
100bp很小了，不管EB还是什么，结合的染料都很少，很难看到，有时候我们曝光后隐约看到就切胶回收，再与载体连接，运气好还能连接成功的

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7楼2017-05-17 00:19:43
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普通回帖

指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HappyKuan at 2017-05-16 07:43:11
酶切的量够不够，50ul酶切5ug质粒再跑胶试试

好的

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4楼2017-05-16 23:38:10
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2017-05-16 08:42:28
片段太小了，酶切之后不太容易看见，你可以将质粒进行单酶切，然后pcr回收

两边的酶切位点是一样的

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5楼2017-05-16 23:38:41
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小冀- at 2017-05-16 23:43:38
那就不要酶切了，直接p
...

嗯嗯好的

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8楼2017-05-18 08:34:23
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张自生 at 2017-05-17 00:19:43
100bp很小了，不管EB还是什么，结合的染料都很少，很难看到，有时候我们曝光后隐约看到就切胶回收，再与载体连接，运气好还能连接成功的

是的啊 好忧伤

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9楼2017-05-18 08:38:23
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1215216349

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张自生 at 2017-05-17 00:19:43
100bp很小了，不管EB还是什么，结合的染料都很少，很难看到，有时候我们曝光后隐约看到就切胶回收，再与载体连接，运气好还能连接成功的

玄学啊
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Nice to meet you!
10楼2017-05-24 11:38:25
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