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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关必赤酵母表达胰岛素的问题
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

[交流] 有关必赤酵母表达胰岛素的问题

大家好，我最近在做必赤酵母表达人胰岛素的课题，用pPIC9K载体，SalI线性化后转到必赤酵母，G418抗性筛选高拷贝，PCR验证插入基因，但是在进行三角瓶甲醇诱导筛选的时候，电泳没有条带。是不是我目的蛋白没有表达，请高手们帮我分析一下。
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1楼 2017-05-12 12:51:15
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
有没有大神给点建议！
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2楼2017-08-05 10:22:52
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dellxiong: 金币+1 2017-08-11 09:43:51
本帖内容被屏蔽
3楼2017-08-05 11:54:37
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 11:54:37
胰岛素的蛋白分子量比较小，确认以下是否是蛋白电泳跑得不好而导致的结果。胰岛素的看看药典，很多都应该有液相的检测方法了，你用液相检测吧。还有是摇瓶可能表达比较低的，你看看你的蛋白要浓缩一下

师兄 您好，我查阅了很多中外文的文献，有不少都是直接取菌夜上清 PAGE电泳。不知道靠不靠谱。能留下一个邮箱联系么，谢谢！
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4楼2017-08-06 09:37:13
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 11:54:37
胰岛素的蛋白分子量比较小，确认以下是否是蛋白电泳跑得不好而导致的结果。胰岛素的看看药典，很多都应该有液相的检测方法了，你用液相检测吧。还有是摇瓶可能表达比较低的，你看看你的蛋白要浓缩一下

另外，文献很多报道通过毕赤酵母表达人胰岛素 都是B30缺失的，不知道为啥!
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5楼2017-08-11 09:44:57
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
6楼2017-08-12 09:12:20
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
werch@sina.cn
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7楼2017-08-20 16:49:14
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大肚子鳄鱼

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问一下，你做G418筛选的时候，直接把转化子点在板子上，还是把转化子摇成菌液再点在板子上？？正在困扰中..........
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8楼2017-09-30 21:33:13
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