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dellxiong

金虫 (初入文坛)

[交流] 有关必赤酵母表达胰岛素的问题

大家好,我最近在做必赤酵母表达人胰岛素的课题,用pPIC9K载体,SalI线性化后转到必赤酵母,G418抗性筛选高拷贝,PCR验证插入基因,但是在进行三角瓶甲醇诱导筛选的时候,电泳没有条带。是不是我目的蛋白没有表达,请高手们帮我分析一下。
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

有没有大神给点建议!
2楼2017-08-05 10:22:52
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

★ ★
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dellxiong: 金币+1 2017-08-11 09:43:51
本帖内容被屏蔽

3楼2017-08-05 11:54:37
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 11:54:37
胰岛素的蛋白分子量比较小,确认以下是否是蛋白电泳跑得不好而导致的结果。胰岛素的看看药典,很多都应该有液相的检测方法了,你用液相检测吧。还有是摇瓶可能表达比较低的,你看看你的蛋白要浓缩一下

师兄 您好,我查阅了很多中外文的文献,有不少都是直接取菌夜上清 PAGE电泳。不知道靠不靠谱。能留下一个邮箱联系么,谢谢!
4楼2017-08-06 09:37:13
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 11:54:37
胰岛素的蛋白分子量比较小,确认以下是否是蛋白电泳跑得不好而导致的结果。胰岛素的看看药典,很多都应该有液相的检测方法了,你用液相检测吧。还有是摇瓶可能表达比较低的,你看看你的蛋白要浓缩一下

另外,文献很多报道通过毕赤酵母表达人胰岛素 都是B30缺失的,不知道为啥!
5楼2017-08-11 09:44:57
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-字仲康

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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6楼2017-08-12 09:12:20
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

7楼2017-08-20 16:49:14
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大肚子鳄鱼

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问一下,你做G418筛选的时候,直接把转化子点在板子上,还是把转化子摇成菌液再点在板子上??正在困扰中..........
8楼2017-09-30 21:33:13
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