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永远的半导体

铁虫 (初入文坛)

[求助] 为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。 已有4人参与

题主小硕一枚,刚开始接触细胞培养。求教下为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。

我养的是HUVEC细胞,在24孔板内接种了10^5个细胞培养了24小时,用的5mg/ml的FDA/PI,按照1:1000加入PBS稀释后避光染色5分钟,然后在倒置荧光显微镜下拍照,结果显示,在绿色荧光下所有细胞都显示绿色,然后在红色荧光下所用的细胞又全部变成了红色。我原来理解的是应该是活细胞发绿色荧光,死了的发红色荧光,但是现在的是发绿色荧光和发红色荧光的细胞完全重叠,所以想向各位大牛请教下,这是怎么一回事?
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17532

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 一束光啊 at 2017-12-11 15:39:56
您好,我最近也在做FDA-PI双染色法,细胞是铜绿微囊藻细胞。可我染色后只能在蓝光下看到活细胞发绿色荧光,在绿光下,死细胞发红色荧光。并没有观察到所说的在蓝色荧光下同时看到绿色和红色的细胞。我染色后清洗了 ...

您好,我最近也准备做FDA/PI对细菌的双染色,它们的激发波长都是多少啊?加这两种染料有没有先后顺序?

发自小木虫Android客户端
9楼2017-12-24 17:00:03
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查看全部 15 个回答

永远的半导体

铁虫 (初入文坛)

补充一下,我对没有染色的细胞进行拍照发现这种细胞没有自发荧光的
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2楼2017-05-09 20:55:15
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永远的半导体(youlinglyw代发): 金币+10, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-07-29 09:34:17
你有洗过细胞吗?如果没洗过,两种染料都在,都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了,按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的
3楼2017-05-10 12:29:36
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-05-10 12:29:36
你有洗过细胞吗?如果没洗过,两种染料都在,都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了,按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的

更正一下,是蓝色光源处看到红光和绿光
4楼2017-05-10 12:33:31
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