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永远的半导体

铁虫 (初入文坛)

[求助] 为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。 已有4人参与

题主小硕一枚,刚开始接触细胞培养。求教下为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。

我养的是HUVEC细胞,在24孔板内接种了10^5个细胞培养了24小时,用的5mg/ml的FDA/PI,按照1:1000加入PBS稀释后避光染色5分钟,然后在倒置荧光显微镜下拍照,结果显示,在绿色荧光下所有细胞都显示绿色,然后在红色荧光下所用的细胞又全部变成了红色。我原来理解的是应该是活细胞发绿色荧光,死了的发红色荧光,但是现在的是发绿色荧光和发红色荧光的细胞完全重叠,所以想向各位大牛请教下,这是怎么一回事?
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永远的半导体

铁虫 (初入文坛)

补充一下,我对没有染色的细胞进行拍照发现这种细胞没有自发荧光的
该用户签名过于个性,系统无法显示!
2楼2017-05-09 20:55:15
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永远的半导体(youlinglyw代发): 金币+10, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-07-29 09:34:17
你有洗过细胞吗?如果没洗过,两种染料都在,都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了,按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的
3楼2017-05-10 12:29:36
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-05-10 12:29:36
你有洗过细胞吗?如果没洗过,两种染料都在,都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了,按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的

更正一下,是蓝色光源处看到红光和绿光
4楼2017-05-10 12:33:31
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XTiger

新虫 (初入文坛)

我没养过细胞,但是做过免疫染色。我也觉得你是不是燃料没清理干净,导致背景杂乱所以看到到处都是。再要么就是你要分清楚你看到的是否是荧光信号,普通荧光显微镜肉眼观察的时候,很多物质在激发光的照射下都能展现出较弱的类似于有荧光的状态,所以最好是有对照组,没有染的好的做参考也得有个空白对照

发自小木虫Android客户端
5楼2017-05-10 21:17:50
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sun-donghong

新虫 (正式写手)

6楼2017-05-13 14:24:22
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奋斗筱青年

新虫 (小有名气)

楼主请问你的问题解决了吗?能不能分享下经验,最近做FDA/PI的双染碰到同样的问题
7楼2017-06-22 20:22:35
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一束光啊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-05-10 12:33:31
更正一下,是蓝色光源处看到红光和绿光...

您好,我最近也在做FDA-PI双染色法,细胞是铜绿微囊藻细胞。可我染色后只能在蓝光下看到活细胞发绿色荧光,在绿光下,死细胞发红色荧光。并没有观察到所说的在蓝色荧光下同时看到绿色和红色的细胞。我染色后清洗了,而且发绿光的发红光的是不同的细胞。我查了两种染料的激发光,PI的激发光在535nm并不在蓝色荧光的范围内啊?为什么还能在蓝色荧光下同时看到绿光和红光?您能帮我分析一下吗?不胜感激。谢谢
8楼2017-12-11 15:39:56
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17532

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 一束光啊 at 2017-12-11 15:39:56
您好,我最近也在做FDA-PI双染色法,细胞是铜绿微囊藻细胞。可我染色后只能在蓝光下看到活细胞发绿色荧光,在绿光下,死细胞发红色荧光。并没有观察到所说的在蓝色荧光下同时看到绿色和红色的细胞。我染色后清洗了 ...

您好,我最近也准备做FDA/PI对细菌的双染色,它们的激发波长都是多少啊?加这两种染料有没有先后顺序?

发自小木虫Android客户端
9楼2017-12-24 17:00:03
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abigale60

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2018-06-05 16:51:34
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