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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。
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永远的半导体

铁虫 (初入文坛)

[求助] 为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。 已有4人参与

题主小硕一枚，刚开始接触细胞培养。求教下为什么用FDA/PI染色后所有细胞全部同时发绿色荧光和红色荧光。

我养的是HUVEC细胞，在24孔板内接种了10^5个细胞培养了24小时，用的5mg/ml的FDA/PI，按照1:1000加入PBS稀释后避光染色5分钟，然后在倒置荧光显微镜下拍照，结果显示，在绿色荧光下所有细胞都显示绿色，然后在红色荧光下所用的细胞又全部变成了红色。我原来理解的是应该是活细胞发绿色荧光，死了的发红色荧光，但是现在的是发绿色荧光和发红色荧光的细胞完全重叠，所以想向各位大牛请教下，这是怎么一回事？
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该用户签名过于个性，系统无法显示！
1楼 2017-05-09 20:52:14
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永远的半导体

铁虫 (初入文坛)
补充一下，我对没有染色的细胞进行拍照发现这种细胞没有自发荧光的
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该用户签名过于个性，系统无法显示！
2楼2017-05-09 20:55:15
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永远的半导体(youlinglyw代发): 金币+10, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2017-07-29 09:34:17
你有洗过细胞吗？如果没洗过，两种染料都在，都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了，按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的
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3楼2017-05-10 12:29:36
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-05-10 12:29:36
你有洗过细胞吗？如果没洗过，两种染料都在，都会发光的。还有你的显微镜荧光设置可能错了，按道理红光和绿光应该都是在在绿色的光源处看到的

更正一下，是蓝色光源处看到红光和绿光
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4楼2017-05-10 12:33:31
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XTiger

新虫 (初入文坛)
我没养过细胞，但是做过免疫染色。我也觉得你是不是燃料没清理干净，导致背景杂乱所以看到到处都是。再要么就是你要分清楚你看到的是否是荧光信号，普通荧光显微镜肉眼观察的时候，很多物质在激发光的照射下都能展现出较弱的类似于有荧光的状态，所以最好是有对照组，没有染的好的做参考也得有个空白对照

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5楼2017-05-10 21:17:50
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sun-donghong

新虫 (正式写手)
AO/PI试试

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6楼2017-05-13 14:24:22
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奋斗筱青年

新虫 (小有名气)
楼主请问你的问题解决了吗？能不能分享下经验，最近做FDA/PI的双染碰到同样的问题
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7楼2017-06-22 20:22:35
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一束光啊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-05-10 12:33:31
更正一下，是蓝色光源处看到红光和绿光...

您好，我最近也在做FDA-PI双染色法，细胞是铜绿微囊藻细胞。可我染色后只能在蓝光下看到活细胞发绿色荧光，在绿光下，死细胞发红色荧光。并没有观察到所说的在蓝色荧光下同时看到绿色和红色的细胞。我染色后清洗了，而且发绿光的发红光的是不同的细胞。我查了两种染料的激发光，PI的激发光在535nm并不在蓝色荧光的范围内啊？为什么还能在蓝色荧光下同时看到绿光和红光？您能帮我分析一下吗？不胜感激。谢谢
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8楼2017-12-11 15:39:56
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17532

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 一束光啊 at 2017-12-11 15:39:56
您好，我最近也在做FDA-PI双染色法，细胞是铜绿微囊藻细胞。可我染色后只能在蓝光下看到活细胞发绿色荧光，在绿光下，死细胞发红色荧光。并没有观察到所说的在蓝色荧光下同时看到绿色和红色的细胞。我染色后清洗了 ...

您好，我最近也准备做FDA/PI对细菌的双染色，它们的激发波长都是多少啊？加这两种染料有没有先后顺序？

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9楼2017-12-24 17:00:03
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abigale60

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2018-06-05 16:51:34
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