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xiaoding095

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶回收连接载体失败的原因(片段5000bp,pMD19-T载体) 已有1人参与

实验中用高保真酶扩增基因组DNA片段,引物1和引物2在植物cDNA中的扩增片段为2380bp,在基因组DNA扩增片段超过5000bp,对基因组DNA扩增产物胶回收(浓度4ng/ul),连接pMD19-T载体,挑单菌落进行菌液pcr验证,只获得近3000处条带。请问如何才能连接到上述载体上,有可能失败的原因是什么?

胶回收连接载体失败的原因(片段5000bp,pMD19-T载体)
基因组DNA扩增片段.jpg


胶回收连接载体失败的原因(片段5000bp,pMD19-T载体)-1
菌液pcr检测载体连接效果.jpg
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这么长的一般都不好连。推荐用无缝克隆吧,效率会比较有保证,最近我做了一个3.6k的,一个4k多一点的,都是无缝克隆直接连目的在体,不需要通过T载体,很迅速。
2楼2017-05-09 08:32:04
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