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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » issr pcr
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w2016yw

新虫 (小有名气)

[求助] issr pcr

pcr新手，做大豆胞囊线虫issr体系优化，但是不懂的太多不知道从哪开始切入，用参考文献里的体系和PCR程序都没有条带感觉文献和概念都要背过了还是不懂，可能是几乎没有基础的原因吧，所以不太理解的了，求指点啊啊啊

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-05-07 19:48:51
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
引物一对浓度测测

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5楼2017-05-09 21:35:01
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
退火温度设置剃度50°上下

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6楼2017-05-09 21:35:38
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
循环不用那么多30个循环就行

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7楼2017-05-09 21:36:32
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w2016yw

新虫 (小有名气)
没人

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2楼2017-05-07 23:28:47
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
发一下你的实验过程看看

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3楼2017-05-09 07:24:32
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w2016yw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 07:24:32
发一下你的实验过程看看

先做了ITS测序，问题不大，然后用文献里的体系和程序做issr，引物是老师给的，暂时没有出条带还在找原因。体系：无菌水18.5，buffer2.5，dNTPs2，镁离子0.5，引物0.2，DNA模板1，Taq酶0.3，一共25微升。程序：94度5分钟；94度30s，48度30s，72度2分钟，循环35；72度10分钟

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4楼2017-05-09 13:30:53
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
是不是少了一个引物啊

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8楼2017-05-09 21:40:23
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w2016yw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 21:35:01
引物一对浓度测测

issr不是只用一个吗？

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9楼2017-05-09 21:55:09
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w2016yw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 21:35:38
退火温度设置剃度50°上下

因为PCR不能做温度梯度，所以想从48手动做到58就是麻烦费时。。。文献里都是35，38循环，所以就试了个35

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10楼2017-05-09 21:56:39
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