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w2016yw

新虫 (小有名气)

[求助] issr pcr

pcr新手,做大豆胞囊线虫issr体系优化,但是不懂的太多不知道从哪开始切入,用参考文献里的体系和PCR程序都没有条带感觉文献和概念都要背过了还是不懂,可能是几乎没有基础的原因吧,所以不太理解的了,求指点啊啊啊

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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wbhnan

新虫 (初入文坛)

5楼2017-05-09 21:35:01
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wbhnan

新虫 (初入文坛)

6楼2017-05-09 21:35:38
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wbhnan

新虫 (初入文坛)

循环不用那么多30个循环就行

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7楼2017-05-09 21:36:32
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w2016yw

新虫 (小有名气)

2楼2017-05-07 23:28:47
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wbhnan

新虫 (初入文坛)

发一下你的实验过程看看

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3楼2017-05-09 07:24:32
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w2016yw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 07:24:32
发一下你的实验过程看看

先做了ITS测序,问题不大,然后用文献里的体系和程序做issr,引物是老师给的,暂时没有出条带还在找原因。体系:无菌水18.5,buffer2.5,dNTPs2,镁离子0.5,引物0.2,DNA模板1,Taq酶0.3,一共25微升。程序:94度5分钟;94度30s,48度30s,72度2分钟,循环35;72度10分钟

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4楼2017-05-09 13:30:53
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wbhnan

新虫 (初入文坛)

8楼2017-05-09 21:40:23
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w2016yw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 21:35:01
引物一对浓度测测

issr不是只用一个吗?

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9楼2017-05-09 21:55:09
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w2016yw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wbhnan at 2017-05-09 21:35:38
退火温度设置剃度50°上下

因为PCR不能做温度梯度,所以想从48手动做到58就是麻烦费时。。。文献里都是35,38循环,所以就试了个35

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10楼2017-05-09 21:56:39
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