应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物直接测序得到双峰
121/2返回列表12下一页
查看: 5044  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吴晓雯

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物直接测序得到双峰 已有3人参与

我做是海洋软体动物DNA条形码方面，序列（700bp）是通过PCR产物直接测序获得的（双向测序）。其中有不少出现双峰的情况，这样的结果我应该怎么办？求大神指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-05-07 10:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-07 22:19:55
有图么？如果只是个别位点双峰并且双向测序都是这个结果，可能是由单核苷酸突变引起的或者是PCR扩增失真，如果大段序列都是这样，要么样品被污染有问题，要么测序有问题。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-05-07 10:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-08 21:08:55
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吴晓雯 at 2017-05-07 12:45:14
我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙

个人认为这个不太像无关序列的污染，我送过很多样品，被无关序列污染的峰图要比这个乱得多。如果双向都是在同一个位点出现这种套峰情况，我还是倾向于核苷酸突变或者也有可能是近源dna污染，可以挑单克隆试试。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-05-07 16:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

吴晓雯

银虫 (初入文坛)
PCR产物直接测序得到双峰

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-05-07 10:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴晓雯

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 10:22:10
有图么？如果只是个别位点双峰并且双向测序都是这个结果，可能是由单核苷酸突变引起的或者是PCR扩增失真，如果大段序列都是这样，要么样品被污染有问题，要么测序有问题。
...

峰图就是这个样子吧 我是小白 也不会分析

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-05-07 10:44:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apety

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-07 22:21:02
你给的峰图应该不是出现双峰的位置，应该是污染的可能性比较大。建议做连接转化挑取单克隆或者重新设计引物
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-07 11:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴晓雯

银虫 (初入文坛)
我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-07 12:45:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Real000Lee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吴晓雯 at 2017-05-07 12:45:14
我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙

同一个位点双向都是双峰么？
赞一下 回复此楼
7楼2017-05-07 16:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴晓雯

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 16:04:01
同一个位点双向都是双峰么？...

不是，同一位点下游双峰，上游是好的，因为我的目的片段小，若上游单序列比对是我要的目的片段，是不是只要上游就可以了啊，双峰就不管了就可以了啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-05-08 19:42:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴晓雯

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 16:09:48
个人认为这个不太像无关序列的污染，我送过很多样品，被无关序列污染的峰图要比这个乱得多。如果双向都是在同一个位点出现这种套峰情况，我还是倾向于核苷酸突变或者也有可能是近源dna污染，可以挑单克隆试试。...

我问别人，人家说测序公司问题，让我重新做，但是这个没找到原因我不敢做啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-05-08 19:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吴晓雯 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭