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木木miumiu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,PCR结果不理想,不明白是为什么? 已有1人参与

目的条带是1142bp,扩增出来目的条带是有,但是很微弱,反倒扩出了一条非目的条带,而且很亮,这是为什么呀?

求助,PCR结果不理想,不明白是为什么?


@wizardfan 发自小木虫Android客户端
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

还有个问题,如果我没看反,就是你这个非特异条带比目的条带短,有一定概率它就在你目的条带中间,万一真是这样,胶回收再扩可能还是会有这个非特异带

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8楼2017-05-07 10:12:47
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

可能是非特异性扩增,也就是你引物能结合在模板多个位置,建议优化引物,或者适当提高退火温度,不过看你这个目的条带还没非特异性条带亮,还是优化一下引物吧。

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2楼2017-05-06 21:16:51
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biofisher

金虫 (著名写手)

有带就切胶回收,以回收的做模板再扩,然后测序检测

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4楼2017-05-07 00:11:17
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

6楼2017-05-07 10:01:28
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木木miumiu at 2017-05-06 22:15:29
谢谢谢谢
...

4楼方法确实不错,能更快获得结果,如果只是小批量实验,切胶纯化是比较好的,引物优化毕竟比较麻烦。但是如果大批量实验,建议还是要把引物弄好,要不然徒增很多工作量

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7楼2017-05-07 10:07:52
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普通回帖

木木miumiu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-06 21:16:51
可能是非特异性扩增,也就是你引物能结合在模板多个位置,建议优化引物,或者适当提高退火温度,不过看你这个目的条带还没非特异性条带亮,还是优化一下引物吧。

谢谢谢谢

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3楼2017-05-06 22:15:29
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冰之雪域

新虫 (小有名气)

5楼2017-05-07 07:20:14
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perfect1020

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 10:12:47
还有个问题,如果我没看反,就是你这个非特异条带比目的条带短,有一定概率它就在你目的条带中间,万一真是这样,胶回收再扩可能还是会有这个非特异带

那个非特异性条带比目的条带长

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9楼2017-05-07 13:08:12
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perfect1020

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by perfect1020 at 2017-05-07 13:08:12
那个非特异性条带比目的条带长
...

不好意思,看错了,是比目的条带短

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10楼2017-05-07 13:09:34
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