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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，PCR结果不理想，不明白是为什么？
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木木miumiu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，PCR结果不理想，不明白是为什么？ 已有1人参与

目的条带是1142bp，扩增出来目的条带是有，但是很微弱，反倒扩出了一条非目的条带，而且很亮，这是为什么呀？

求助，PCR结果不理想，不明白是为什么？


@wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-05-06 20:49:50
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
还有个问题，如果我没看反，就是你这个非特异条带比目的条带短，有一定概率它就在你目的条带中间，万一真是这样，胶回收再扩可能还是会有这个非特异带

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8楼2017-05-07 10:12:47
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
可能是非特异性扩增，也就是你引物能结合在模板多个位置，建议优化引物，或者适当提高退火温度，不过看你这个目的条带还没非特异性条带亮，还是优化一下引物吧。

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2楼2017-05-06 21:16:51
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biofisher

金虫 (著名写手)
有带就切胶回收，以回收的做模板再扩，然后测序检测

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4楼2017-05-07 00:11:17
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2017-05-07 10:01:28
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木木miumiu at 2017-05-06 22:15:29
谢谢谢谢
...

4楼方法确实不错，能更快获得结果，如果只是小批量实验，切胶纯化是比较好的，引物优化毕竟比较麻烦。但是如果大批量实验，建议还是要把引物弄好，要不然徒增很多工作量

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7楼2017-05-07 10:07:52
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普通回帖

木木miumiu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-06 21:16:51
可能是非特异性扩增，也就是你引物能结合在模板多个位置，建议优化引物，或者适当提高退火温度，不过看你这个目的条带还没非特异性条带亮，还是优化一下引物吧。

谢谢谢谢

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3楼2017-05-06 22:15:29
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冰之雪域

新虫 (小有名气)
同意4楼的建议

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5楼2017-05-07 07:20:14
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 10:12:47
还有个问题，如果我没看反，就是你这个非特异条带比目的条带短，有一定概率它就在你目的条带中间，万一真是这样，胶回收再扩可能还是会有这个非特异带

那个非特异性条带比目的条带长

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9楼2017-05-07 13:08:12
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by perfect1020 at 2017-05-07 13:08:12
那个非特异性条带比目的条带长
...

不好意思，看错了，是比目的条带短

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10楼2017-05-07 13:09:34
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