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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖电泳
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卖海盗

新虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖电泳 已有2人参与

我的琼脂糖电泳完条带这样 为什么 第一次学这个 不知道什么原因  条带都不怎么亮 还那么弥散 mark还好啊 ！ 后来提高了退火温度 亮带往上移了 但还是弥散

琼脂糖电泳


@飞约疯人院 @飞约疯人院 @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-05-06 11:56:28
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何厚铧

新虫 (初入文坛)
弥散是因为提DNA时DNA可能因机械拉扯断裂 可以试试重提

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2楼2017-05-06 12:14:19
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mark没问题起码说明凝胶和电泳条件本身没问题，条带弥散是PCR产物的问题，可能是模板降解了，或者提取过程中机械力把他打碎了，再有就是PCR条件不对，优化一下退火温度试试。或者换taq酶，总之一个一个条件排除吧。

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6楼2017-05-07 10:28:14
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普通回帖

常三妹

新虫 (小有名气)
我也遇到这个问题了，不是DNA不纯吧

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坚持坚持着就下去了！
3楼2017-05-06 22:23:00
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biofisher

金虫 (著名写手)
检查引物，模板，退火温度一一核实

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4楼2017-05-07 00:13:49
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biofisher

金虫 (著名写手)
也有可能是模板浓度高引起的

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5楼2017-05-07 00:21:24
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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换TBE缓冲液配胶和电泳，如果还是这样，应该是要摸索退火温度和模板DNA，也很可能要换引物。
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为什么
7楼2017-05-07 23:40:49
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ztt279

新虫 (初入文坛)
我也有过这种情况，当时是引物浓度太高，我后来稀释了12倍，就好多了

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8楼2017-05-07 23:55:55
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卖海盗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ztt279 at 2017-05-07 23:55:55
我也有过这种情况，当时是引物浓度太高，我后来稀释了12倍，就好多了

引物 先是1OD +标注缓冲液量 再用5ul+45ul缓冲液配的 浓度还是太高吗

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9楼2017-05-10 17:32:52
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卖海盗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 10:28:14
mark没问题起码说明凝胶和电泳条件本身没问题，条带弥散是PCR产物的问题，可能是模板降解了，或者提取过程中机械力把他打碎了，再有就是PCR条件不对，优化一下退火温度试试。或者换taq酶，总之一个一个条件排除吧。
...

用试剂盒提的DNA模版  不知道什么原因会导致机械拉断  谢谢！ 现在正在调节一些量跟条件 准备排除一个个因素 谢谢！

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10楼2017-05-10 17:36:04
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