3楼: Originally posted by 安志达天下 at 2017-05-05 23:16:55
第二对引物应该可以扩增出来，建议使用高保真酶扩增，延伸时间提高到三分钟试试

9楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2017-05-07 15:12:24
模板没有问题，用的模板是之前做RACE的反转录产物，我稀释了用的，而且我拿别的引物做了对照，条带很亮...

6楼: Originally posted by bestzdz at 2017-05-06 10:55:29
试试这个：
F: ACACGTACGTTGTGAGTTGTGAC
R: GAAACATAAGAAATTGGGTAAAGTGTACTC

12楼: Originally posted by 547star at 2017-05-07 20:52:29
BLAST没有找到别的接近全长的相似序列，除非样本来源跟参考序列一样，否则建议先从700-2300bp区间，甚至1300-2000bp区间，设计一对引物，最好是在保守区的，扩增测序，看看跟其他更接近，可能样本的跟你目前的参考 ...

10楼: Originally posted by aaa0001984 at 2017-05-07 15:46:11
换phusion polymerase之类具有长片段扩增能力的酶，普通的taq之类没这能力。而且你的PCR体系也要注意扩增时间，别还在合成片段呢，温度就开始95度进行下一个循环了
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