全长P不出来怎么办，求指导 - 分子生物 - PCR相关 - 第3页小木虫论坛-学术科研互动平台

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新虫 (著名写手)

送红花一朵

引用回帖:

4楼: Originally posted by pingweihh at 2017-05-05 23:42:26
我最近扩的全长都是六千左右的，用的primerstar，都扩出来了，楼主可以试试

21楼2017-05-10 17:13:51

铜虫 (初入文坛)

模版最好找好的反转录试剂盒合成cDNA，建议用invitrogen的，这是克隆成功的前提，用primestar可以保证保真性，LA保真性差点，会出现错配。然后用降落PCR，既不用摸退货温度，特异性还高。当然，大片段的引物设计要长点才行。

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22楼2017-05-13 13:52:34

新虫 (正式写手)

我用南京诺维赞公司的高保真酶扩过3800多的片段，扩过三次，第三次效果非常好，条带单一且亮，建议你换酶试试

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天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过

23楼2017-10-24 00:30:59

新虫 (小有名气)

引用回帖:

2楼: Originally posted by dadaoxing at 2017-05-05 22:21:49
你好，全长有点长，首先要保证酶的质量比较好，引物应在20-25bp大小之间，要扩出全长需要知道比目的片段更长的基因序列，我想这个原因不必解释吧，祝好

我是pcr小白，为什么扩全长需要比目的片段更长？

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24楼2017-10-24 22:47:52

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