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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长P不出来怎么办，求指导
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 全长P不出来怎么办，求指导 已有4人参与

求哪位大侠给设计一对引物来扩增全长（3512bp），我已经做了2对引物了，都做了温度梯度，然而都没有任何条带
ACACGTACGTTGTGAGTTGTGACCACTACTTTCCCACAAAGAATTTTTTTTTTTTTTCCTAAAAATAAAAAAGATCTCATTTCTATAAGTTGTTTTAGTTTGATTTTACTTGCAGAAGAAAATTGAAGACATGGGAACTGAGGATCATCACCACCAGCATCATCATTCGGACACAGAGGTTCTTGGCAACGAGAGGATCCCGTACAGTGGTCCGCTAAGCGGCCCTTTGAACAAGAGAGTTGGCAGGAAGAGCACCAAGTTTAATTTGGCGACGGAATCAAGCTCAGGCTCGTCACCTCACGATGAGCCTTACGTTGAGATCACACTCGACGTCCGTGACGACTCGGTGGCTGTTCACAGCGTTAAGGCCGCTGGTGGGGATCATAGTAATCTTCAGGAAGATCCTGAGATTACTTTACTTGCAAAAGGGTTAGAGAAAAGGTCAACTTCTTTTGGTTCCAGTGTTGCTAGAACGGCTTCCGCGAAAATCAGGCAGGTGTCTCAAGAGCTCAAGCGCTTGGCTTCCTTTGCGAAGAAGCCTCAGCCGCCTGCCCGGTTTGATAGGAACAAGTCTGCTGCAGCTTATGCTTTGAAGGGGCTCAAGTTCATTAGCAAGACTGATGGTGGTGCTGGTTGGGCTAATGTTGAGAAGCGATTTGATGAAATAACCGCATCTACTAATGGGGTCTTGCCTCGAGCTCGCTTTGGCGAATGCATAGGAATGAACAAGGACTCGAAGGATTTCGCTGTTGAGTTGTTTGATGCTCTTACTCGGAGACGTAATATTCAAGGGGATACAATCACTAAGGATCAGCTAAGAGAGTTTTGGGATCAGATCTCTGATCAGAGTTTTGATTCCAGGCTTCAAACTTTCTTTGACATGGTTGATAAAGATGCAGATGGCAGAATCACGGAAGATGAAGTCAGAGAGATTATCACTCTCAGTGCTTCAGCAAACAAGCTCTCAAATATCCAGAAGCAAGCAGAGGAATATGCAGCTCTTATTATGGAAGAATTGGATCCTGACCATCTCGGATACATCATGATAGACAACCTGGAAATGCTTCTGTTACAAGCACCGGCGCAATCTGTTAAAGGTGGTGAGAGTCGAAACTTGAGCCACATGTTGAGCCAGAAGCTGAAGCCTACACAATTTGACAACCCAATTAGGAGATGCTGCGACAGCACCATGTACTTTTTACTGGACAATTGGCAAAGGGTGTGGGTGATGGCACAGTGGATTGGAGTGATGGCAGGGCTATTTACATACAAATACATTCAGTATAAAAACAGAGCTGCATTTGAAGTAATGGGACACTGCGTGTGCATGGCCAAAGGTGCTGCTGAGACGCTAAAATTCAACATGGCTCTGATTTTATTACCCGTCTGTCGAAACACCATTACATGGCTCAGAAACAAGACCAAACTCAGTGGTGTTGTTCCATTTGATGACAACCTCAATTTCCACAAGGTGATAGCAGTTGGAATCTCAATTGGGGTCGGAATACATGCTATTTCACATTTAGCATGCGATTTCCCTCGGCTTATAAATGCAAGTGAAGAGAAGTATGAGCCAATGGAGCCATATTTTGGGGATCAGCCCAAAAATTACTGGCATTTTGTGAAGTCAGTAGAAGGGGTAACTGGGATTGTGATGGTTGTTCTGATGGCTATCGCCTTCACACTTGCAACCCCATGGTTCCGGAGAAACAAGCTCAATTTGCCAAAGCCGTTAAAGAAGCTCACTGGGTTCAATGCCTTTTGGTATTCTCATCACCTTTTTGTCATCGTTTACACCCTGCTCATTGTGCATGGCCAATACCTTTACTTGACCAAAAAATGGTACAAGAAGACGACATGGATGTACTTGGCAATTCCAATTTGTCTTTATGCCACTGAGCGGTTGATTAGGGCACTGAGGTCAAGCATTAAGGCAGTTTCCATACAAAAGGTGGCTGTTTATCCTGGAAATGTGCTGGCTCTTCACATGTCAAAGCCAGATAGATTCAGATACAAGAGTGGGCAGTACATGTTTGTCAATTGTGCTGCTGTGTCCCCATTCGAATGGCACCCATTTTCAATAACTTCTGCCCCGGATGATGACTACCTCAGTGTTCACATTAGAACTCTTGGTGACTGGACTCGTCAACTCAGAACAGTTTTCTCAGAGGTATGCCGACCACCTCCAAACGGAATAAGTGGACTCCTCCGAGCCGAGGGACATAACAATCCTGATTTTCCTAGAGTTTTGATTGACGGTCCATATGGAGCTCCAGCACAAGACTACAAAGAGTATGAGGTGGTTTTATTAGTTGGTCTGGGAATTGGAGCAACTCCGATGATCAGCATTGTTAAAGACATAGTGAACAACATGAAAGCCATAGAGGAAGAAGAAGAAAATGATTTAGAAAACGGTCGTGACACCGGCGTTAACACAACATCATCATCATCGACAACAACCACGAGCCCTTCTTCTTCTGGACACAGAAGAAGGGACCAATTCAGGACAAGAAGAGCATACTTCTATTGGGTTACAAGAGAGCAAGGCTCGTTCGATTGGTTTAAGGGAGTGATGAATGAGGTGGCTGAATTGGACCACAACAATGTCATAGAGCTTCACAATTACTGCACCAGTGTTTATGAAGAAGGTGATGCTCGCTCAGCTCTCATTGCCATGCTTCAGTCCCTCAATCACGCCAAGAATGGCGTTGACGTTGTCTCTGGAACACGCGTTAAGTCACATTTCGCCAAGCCTAATTGGCGCAATGTGTACAAACGCGTTGCTCTCAATCACCCTGATTCTAGAGTTGGTGTTTTCTATTGCGGGGCACCGGCACTGACAAAAGAGCTACGACACCTAGCTTTGGATTTCTCTCACAAGACAAGCACCAAGTTTGATTTCCATAAAGAAAACTTCTAGATCAAGTCCCTCCTGATTTCCACCATTATATATCATCTCTTCCACTCCGTTTTCTCGTACAAAGCCTGTGGCATGGCCCACTGGCCCTTATGTTTATAGAAAAATCATATCAATATTTGTTTGGTACCCAGTTGATTTTGCTGCAAAATCACTAATAGAGAGCATTAGAAATATCAAGCGGACAAAGGTTGGTGGGTAGTTGATATCAAGGCCACACCACACTGGACACACAACACATGGCAAGGGAGATATAGGCCGAAAAAGGGGTTTAGCAAAAAAGTCATGCTCAGCCATTTCCTTTTGTTAAAAGTTGTGGTCCAAGCCAATAATTTTGTGAGAAATAGTAATAATGGCAGCCTGGCAGCCACCACTAATAATGGCAGCCTGGCAGCCACCACCAACTCAGTCCTTAACAGCCAAATGTAAAAGGGTTTTTGTTTTGTTTTCTTTTCTTTTTGGTTGGAGTAATTTGTTGTTTTATTTGATTAATTAAAGTTGCGATGTCAATTGAATGGGGTCGTAAGCCCTTTAAAATGTAAGTATGTATTGAATAATTAGTTCGGAGTACACTTTACCCAATTTCTTATGTTTC

这是我之前的引物
F1：ACACGTACGTTGTGA
R1：GAAACATAAGAAATTGGG


F2：ACACGTACGTTGTGAGTTGTGACCACTACTTTCCCACAAA
R2：GAAACATAAGAAATTGGGTAAAGTGTACTCCGAACTAATT
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1楼 2017-05-05 22:15:30
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by aaa0001984 at 2017-05-07 15:46:11
换phusion polymerase之类具有长片段扩增能力的酶，普通的taq之类没这能力。而且你的PCR体系也要注意扩增时间，别还在合成片段呢，温度就开始95度进行下一个循环了
...

其实3512bp并不算很长啊，按理说普通Taq酶都能扩增这个长度，为了防止突变，用了LA Taq，可是没有条带，而且延伸时间是充分的，4min呢
赞一下 回复此楼
15楼2017-05-07 20:58:17
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:22:27
本帖内容被屏蔽
2楼2017-05-05 22:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

木虫 (小有名气)

小志
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:22:45
本帖仅楼主可见
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3楼2017-05-05 23:16:55
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:23:03
本帖仅楼主可见
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饿的神啊
4楼2017-05-05 23:42:26
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普通表情 龙 兔 虎 猫
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