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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 如何加Flag、HA标签

小白想要做蛋白互作,制备单克隆抗体很麻烦,所以想通过给PCR给目的片段加一个通用标签(比如Flag),然后用该标签对应的商品化的抗体(anti-Flag)来做杂交。那么,该如何给我的目的序列加标签呢?看到很多的Flag标签都加在5端,并且加了kozak序列,那么请问顺序是怎么样的呢?
若想在5端加Flag标签,是否是“保护碱基+酶切位点+GCCACCATG+Flag序列+目的基因CDS序列(上游引物)”,CDS序列的ATG还保留吗,移码突变怎么查看呢;
若想在3端加HA序列,是否是 “下游引物+HA序列+酶切位点+保护碱基”,CDS部分的终止子应该被删掉,加在HA序列后,那具体怎么操作啊?
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zhibaolibo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2017-05-07 16:20:34
要不同的标签,对应不同的商品化的抗体,才方便后续做蛋白互作吧,直接合成带荧光修饰的引物应该不行吧...

你说的对,现在解决了吗
我是搞科研的,
4楼2018-03-18 17:28:45
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

直接合成带荧光修饰的引物不就好了吗

发自小木虫Android客户端
2楼2017-05-05 15:41:54
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-05-05 15:41:54
直接合成带荧光修饰的引物不就好了吗

要不同的标签,对应不同的商品化的抗体,才方便后续做蛋白互作吧,直接合成带荧光修饰的引物应该不行吧
3楼2017-05-07 16:20:34
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