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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 如何加Flag、HA标签
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 如何加Flag、HA标签

小白想要做蛋白互作，制备单克隆抗体很麻烦，所以想通过给PCR给目的片段加一个通用标签（比如Flag），然后用该标签对应的商品化的抗体（anti-Flag）来做杂交。那么，该如何给我的目的序列加标签呢？看到很多的Flag标签都加在5端，并且加了kozak序列，那么请问顺序是怎么样的呢？
若想在5端加Flag标签，是否是“保护碱基+酶切位点+GCCACCATG+Flag序列+目的基因CDS序列（上游引物）”，CDS序列的ATG还保留吗，移码突变怎么查看呢；
若想在3端加HA序列，是否是 “下游引物+HA序列+酶切位点+保护碱基”，CDS部分的终止子应该被删掉，加在HA序列后，那具体怎么操作啊？
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1楼 2017-05-05 15:25:14
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
直接合成带荧光修饰的引物不就好了吗

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2楼2017-05-05 15:41:54
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-05-05 15:41:54
直接合成带荧光修饰的引物不就好了吗

要不同的标签，对应不同的商品化的抗体，才方便后续做蛋白互作吧，直接合成带荧光修饰的引物应该不行吧
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3楼2017-05-07 16:20:34
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zhibaolibo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2017-05-07 16:20:34
要不同的标签，对应不同的商品化的抗体，才方便后续做蛋白互作吧，直接合成带荧光修饰的引物应该不行吧...

你说的对，现在解决了吗
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我是搞科研的，
4楼2018-03-18 17:28:45
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