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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合PCR测序突变，但选择其他两个酶无法成功PCR
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扬花锡白

铜虫 (小有名气)

[求助] 融合PCR测序突变，但选择其他两个酶无法成功PCR 已有1人参与

各位朋友，最近在做融合PCR，片段全部都是用TAKARA公司Ex-Taq获得，但是测序发现会有突变，单个片段不是很长，都在1000多bp。但是TAKARA公司的Primestar以及宝赛公司的superpfu均无法获得目的片段，求各位出出主意，在此拜谢
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1楼 2017-05-03 21:01:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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扬花锡白: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2017-05-03 23:18:44
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-05 16:16:35
Ex-Taq不适合扩增需要后续做融合PCR的片段，因为其还在3‘加A尾巴，导致基因突变。需用高保真酶进行PCR，至于高保真PCR酶你可以多试几个公司的。如果你是以质粒为模板进行PPCR，1000bp左右的片段，很容易扩增。
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2楼2017-05-03 21:43:29
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扬花锡白

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2017-05-03 21:43:29
Ex-Taq不适合扩增需要后续做融合PCR的片段，因为其还在3‘加A尾巴，导致基因突变。需用高保真酶进行PCR，至于高保真PCR酶你可以多试几个公司的。如果你是以质粒为模板进行PPCR，1000bp左右的片段，很容易扩增。

最近刚发现这个问题，最近开始试试其他高保真酶

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3楼2017-05-03 23:16:28
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chenmx1257

新虫 (初入文坛)
这个如果有设计酶切位点，增加的那个A可以切掉，不会影响。主要还是看复制过程是否突变。

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4楼2017-05-23 22:15:06
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chenmx1257

新虫 (初入文坛)
takara的premix酶单位太少，我们实验室因此失败率很高。增加酶量有改善，不过感觉被欺骗。

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5楼2017-05-23 22:17:03
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