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meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)

1.RNA浓度不同和你每管的上样量有很大关系。   2.你的RNA有降解并且有5s带,建议用trizol一直这种结果的话可以换用试剂盒提。  3.用于qPCR的RNA要求跟你逆转录所用的试剂盒有关,我逆转录试剂盒要求RNA用量1ug,所以我的浓度范围要在170-700之间。

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11楼2017-05-03 23:54:01
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宁文峰

新虫 (小有名气)

能测浓度最好,通过吸光度比值看纯度,,测不了浓度就跑胶看,首先3条带清晰没有明显拖尾表明纯度还可以,takara marke上杨7v(好像是,可以再查一下)750的带大约亮度对应为100ng/v,可以估算rna浓度。建议提取后直接反转录后上荧光,这样可以排除某些基因降解速率差异问题,批次间可以trizol-80冻存,一起提,,相对定量只要反转录后能批出内参就好,对rna量没有太多要求。只要别太高就好。

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所追求的不在明天,而在现在以前
12楼2017-05-04 13:19:13
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)

trizol法提RNA最好有个匀浆仪,这样能避免研磨时的降解损失
13楼2017-05-05 14:47:33
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ufolt16

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by LIFERESET at 2017-05-05 14:47:33
trizol法提RNA最好有个匀浆仪,这样能避免研磨时的降解损失

你好,匀桨仪的话手持的那种可以吗,是把叶片剪碎收集到ep管里,然后扔液氮里速冻拿出来加trizol然后匀浆吗?请问具体是这样操作吗

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14楼2017-05-08 14:20:59
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ufolt16

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 宁文峰 at 2017-05-04 13:19:13
能测浓度最好,通过吸光度比值看纯度,,测不了浓度就跑胶看,首先3条带清晰没有明显拖尾表明纯度还可以,takara marke上杨7v(好像是,可以再查一下)750的带大约亮度对应为100ng/v,可以估算rna浓度。建议提取后直 ...

你好,trizol冻存是不是说研磨成粉后收集到管里然后加trizol后低温冻存,然后等所有样品取到后一起进行后面的步骤?

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15楼2017-05-08 14:22:36
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