| 查看: 3250 | 回复: 14 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
RNA提取质量已有5人参与
|
|||
|
使用方法：Trizol 目的：qPCR 样品：番茄叶片 问题描述：目前处于预实验阶段，前后提取了几次番茄叶片RNA，之前并未太过关注电泳图（因为并没有特别处理，就是一般的跑DNA的胶和缓冲液，私以为电泳可能也有降解效果可能会不好，但是如果严格处理，又太耗时耗力），只是着重测了浓度和OD比值，OD260：OD280一般在1.9到2.0左右，浓度却很奇怪，有时同时取得两个样品，一个六七百ng，一个却只有八九十一百多，很是纠结。后来尝试进行qPCR，主要还是想摸摸条件，结果非常不好，被老板骂，要我跑电泳确认RNA质量，结果前后提取的RNA跑了几次电泳，效果都不好，自己也没信心，不知道这RNA提成什么样才能进行下一步试验。有几个问题希望专家解疑： 1. 提取RNA浓度差异如此大是什么原因？ 2. 就目前提出的RNA的电泳图看质量，有什么问题，下一步怎么改进？ 3. 什么程度是满足qPCR的高质量RNA PS：染色是跑完胶扔到EB里染色，每次染色时间没有特意记，可能有染色不充分的，比如最后一张图。。。。  第一次提取  第二波，若干次提取，一起跑的电泳  第三次  第四次，第一泳道是第三次提的，2345是第四次提的，1234按照3ul+6ul水上样，5是4按照6ul上样  第五次@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
|
能测浓度最好，通过吸光度比值看纯度，，测不了浓度就跑胶看，首先3条带清晰没有明显拖尾表明纯度还可以，takara marke上杨7v（好像是，可以再查一下）750的带大约亮度对应为100ng/v，可以估算rna浓度。建议提取后直接反转录后上荧光，这样可以排除某些基因降解速率差异问题，批次间可以trizol-80冻存，一起提，，相对定量只要反转录后能批出内参就好，对rna量没有太多要求。只要别太高就好。 发自小木虫Android客户端 |
12楼2017-05-04 13:19:13
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2017-05-02 16:39:40
|
请问上样量是什么意思？您看我理解对吗？trizol的比例是50-100mg：1ml，您的意思是不是指我的叶片按10.20.40…mg还是加1ml trizol来算，请问是这个意思吗 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-05-02 16:53:04
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2017-05-02 16:57:01