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RNA提取质量 已有5人参与
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使用方法：Trizol 目的：qPCR 样品：番茄叶片 问题描述：目前处于预实验阶段，前后提取了几次番茄叶片RNA，之前并未太过关注电泳图（因为并没有特别处理，就是一般的跑DNA的胶和缓冲液，私以为电泳可能也有降解效果可能会不好，但是如果严格处理，又太耗时耗力），只是着重测了浓度和OD比值，OD260：OD280一般在1.9到2.0左右，浓度却很奇怪，有时同时取得两个样品，一个六七百ng，一个却只有八九十一百多，很是纠结。后来尝试进行qPCR，主要还是想摸摸条件，结果非常不好，被老板骂，要我跑电泳确认RNA质量，结果前后提取的RNA跑了几次电泳，效果都不好，自己也没信心，不知道这RNA提成什么样才能进行下一步试验。有几个问题希望专家解疑： 1. 提取RNA浓度差异如此大是什么原因？ 2. 就目前提出的RNA的电泳图看质量，有什么问题，下一步怎么改进？ 3. 什么程度是满足qPCR的高质量RNA PS：染色是跑完胶扔到EB里染色，每次染色时间没有特意记，可能有染色不充分的，比如最后一张图。。。。  第一次提取  第二波，若干次提取，一起跑的电泳  第三次  第四次，第一泳道是第三次提的，2345是第四次提的，1234按照3ul+6ul水上样，5是4按照6ul上样  第五次@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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2楼2017-05-02 16:39:40
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请问上样量是什么意思？您看我理解对吗？trizol的比例是50-100mg：1ml，您的意思是不是指我的叶片按10.20.40…mg还是加1ml trizol来算，请问是这个意思吗 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-05-02 16:53:04
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梯度的话不太现实…我是用研钵研磨再用小勺收集到ep管，担心液氮干了会解冻造成降解，这一步都是快了再快的收集，损失其实是蛮大的，所以每次样品都是过量研磨的怕损失太大，一般都是收集的差不多到ep管的0.1ml那就加trizol了… 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-05-02 17:10:11
