24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ufolt16

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 346
散金: 70
帖子: 27
在线: 17.4小时
虫号: 3393598
注册: 2014-09-02
专业: 植物生理与生化

[求助] RNA提取质量已有5人参与

使用方法：Trizol
目的：qPCR
样品：番茄叶片
问题描述：目前处于预实验阶段，前后提取了几次番茄叶片RNA，之前并未太过关注电泳图（因为并没有特别处理，就是一般的跑DNA的胶和缓冲液，私以为电泳可能也有降解效果可能会不好，但是如果严格处理，又太耗时耗力），只是着重测了浓度和OD比值，OD260：OD280一般在1.9到2.0左右，浓度却很奇怪，有时同时取得两个样品，一个六七百ng，一个却只有八九十一百多，很是纠结。后来尝试进行qPCR，主要还是想摸摸条件，结果非常不好，被老板骂，要我跑电泳确认RNA质量，结果前后提取的RNA跑了几次电泳，效果都不好，自己也没信心，不知道这RNA提成什么样才能进行下一步试验。有几个问题希望专家解疑：
1. 提取RNA浓度差异如此大是什么原因？
2. 就目前提出的RNA的电泳图看质量，有什么问题，下一步怎么改进？
3. 什么程度是满足qPCR的高质量RNA
PS：染色是跑完胶扔到EB里染色，每次染色时间没有特意记，可能有染色不充分的，比如最后一张图。。。。

第一次提取