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德卡

新虫 (初入文坛)

[求助] Gateway的LR反应后扩增不出条带已有2人参与

我做的是将E8启动子和目的基因片段通过LR反应连接到表达载体上,但是LR反应后,用E8启动子的引物扩增不出来条带。用的是菌落PCR,吸两百微菌液离心,去离子水重悬,体系是20微升,mastermix10微升,水6微升,引物2微,模版2微。条件是94°C5min,94°C30s,48-55°C梯度30s,72°C2min45s,片段大小为2400bp,30个循环,老是扩增不出条带。但是用目的基因的引物可以阔出小的片段。求问该怎么办啊

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阿小儿七

新虫 (初入文坛)

我的也是gateway构的载体 用载体上游引物目的序列下游引物可以p出质粒p不出菌液怎么办?

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11楼2018-11-07 01:11:52
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德卡

新虫 (初入文坛)

2楼2017-04-28 00:02:15
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
3楼2017-04-28 00:47:10
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-30 09:50:12
这个可以用infusion重组

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竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
4楼2017-04-28 00:48:06
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