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Gateway的LR反应后扩增不出条带 已有2人参与
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我做的是将E8启动子和目的基因片段通过LR反应连接到表达载体上，但是LR反应后，用E8启动子的引物扩增不出来条带。用的是菌落PCR，吸两百微菌液离心，去离子水重悬，体系是20微升，mastermix10微升，水6微升，引物2微，模版2微。条件是94°C5min，94°C30s，48-55°C梯度30s，72°C2min45s，片段大小为2400bp，30个循环，老是扩增不出条带。但是用目的基因的引物可以阔出小的片段。求问该怎么办啊 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2017-04-28 00:02:15
MAS_rice
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3楼2017-04-28 00:47:10
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4楼2017-04-28 00:48:06
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-01 22:34:17
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-01 22:34:17
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也有可能是你们的LR酶坏掉了，我之前也没做出来，后来买了新的酶就做出来了。infusion 要重新设引物，有在线设引物的网站，LR酶还挺贵的，你可以尝试infusion 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2017-04-30 10:08:49
7楼2017-05-01 21:44:03
8楼2017-05-24 09:23:07
9楼2017-05-24 09:52:49
10楼2018-07-09 00:15:21