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zhangmeiqiji

银虫 (初入文坛)

[求助] 人源蛋白质在细菌内不能表达,求解

我的蛋白是人源蛋白,克隆在pET-28a载体上,在BL21里表达的很好,但是后来需要换到pBAD载体上,得用DH10B表达,结果就表达不出来了,我确定克隆是没问题的,序列都对,现在就怀疑是因为DH10B的蛋白酶基因没有被敲掉,所以我的蛋白被降解掉了,想问问有没有相关经验的高手,这样可以怎么解决呢?可不可以在诱导表达的时候加蛋白酶抑制剂啊?或者要加个信号肽给拉到胞间质表达吗?我的蛋白还是需要一定表达量的,担心胞间质表达量会很低啊?求高手解答,不胜感激~谢谢
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闲来小译

金虫 (正式写手)

★
zhangmeiqiji(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-27 08:53:25
胞内表达加蛋白酶抑制剂应该行不通。间质表达可以试试。这两种蛋白表达系统诱导原理上不一样。后者有点过时了。bl21里面应该也有蛋白酶,蛋白会降解,倒不至于一点都没有。如果是做结构的话,为啥非得用后面那种表达方式呢?
2楼2017-04-27 06:21:35
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zhangmeiqiji

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 闲来小译 at 2017-04-27 06:21:35
胞内表达加蛋白酶抑制剂应该行不通。间质表达可以试试。这两种蛋白表达系统诱导原理上不一样。后者有点过时了。bl21里面应该也有蛋白酶,蛋白会降解,倒不至于一点都没有。如果是做结构的话,为啥非得用后面那种表达 ...

可是相用DH10B表达,DH10B里不能表达,BL21里还是能表达的很好的,我不做结构,就是要提蛋白做质谱……不知道降低诱导温度会不会有所改善啊?
3楼2017-05-01 18:21:48
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