| 查看: 1406 | 回复: 18 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
安静的位置i金虫 (小有名气)
|
[交流]
关于用NcoI位点设计引物
|
||
|
我想设计一条引物，以NcoI为酶切位点，它的识别序列是CCATGG。 （1）这样它自身带有ATG，而ATG后面的G恰好会造成移码突变，我是不是需要在G后面再补加两个碱基，这样蛋白就变了，能不能有什么办法去掉那个G，表达天然的目的蛋白呢（除了下面的）？ （2）如果酶切后用klenow补平，是不是就会补成CCATG,这样就没有最后的那个G了？ |
回复此楼» 猜你喜欢
博士读完未来一定会好吗
已经有24人回复
-
导师想让我从独立一作变成了共一第一
已经有9人回复
-
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有11人回复
-
读博
已经有4人回复
-
JMPT 期刊投稿流程
已经有4人回复
-
心脉受损
已经有5人回复
-
Springer期刊投稿求助
已经有4人回复
-
小论文投稿
已经有3人回复
-
申请2026年博士
已经有6人回复
安静的位置i
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5170.1
- 散金: 45
- 红花: 1
- 帖子: 138
- 在线: 45小时
- 虫号: 405703
- 注册: 2007-06-18
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
4楼2009-01-06 09:14:33
eaglezheng
铁虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 19.7
- 散金: 1257
- 红花: 3
- 帖子: 227
- 在线: 152.1小时
- 虫号: 520449
- 注册: 2008-03-07
- 性别: GG
- 专业: 作物栽培与耕作学
2楼2009-01-05 23:22:13
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44385.9
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4667
- 在线: 778.7小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
★ ★ ★ ★ ★
安静的位置i(金币+5,VIP+0):谢谢！
安静的位置i(金币+5,VIP+0):谢谢！
|
1。基因通常以ATG作为启始密码子，如果NcoI为酶切位点进行连接表达，而基因第4个碱基不是G的话，可以把第4个碱基变为G，这样突变了一个氨基酸，对酶学特性影响不大，总比补加两个碱基从而多一个氨基酸较好。（补加的G是去不掉的）。如果你想表达的蛋白一个氨基酸也不变，那可以考虑用平端连接。也就是ATG........，用高保真酶（如pfu ，pyrobest等）PCR后产生平末端，不用加酶切位点，但平末端连接效果好差，而且有相反的方向。。。。 2。酶切后用klenow补平，也去不掉G的，因为读的方向是5‘-ATGG。。。。3’ |
3楼2009-01-06 02:12:14
charon1982
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 5106.2
- 散金: 350
- 红花: 12
- 帖子: 1250
- 在线: 469.8小时
- 虫号: 224872
- 注册: 2006-03-22
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2009-01-06 10:02:55