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安静的位置i

金虫 (小有名气)

[交流] 关于用NcoI位点设计引物

我想设计一条引物,以NcoI为酶切位点,它的识别序列是CCATGG。
(1)这样它自身带有ATG,而ATG后面的G恰好会造成移码突变,我是不是需要在G后面再补加两个碱基,这样蛋白就变了,能不能有什么办法去掉那个G,表达天然的目的蛋白呢(除了下面的)?
(2)如果酶切后用klenow补平,是不是就会补成CCATG,这样就没有最后的那个G了?
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

很有意思,怎么感觉像你在人为的加上一个ATG啊,而不是你原有目的基因的原始启动子啊
帮助虫友,提升自己
5楼2009-01-06 10:02:55
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

那你引入ATG,也不一定在这里启动表达啊
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8楼2009-01-06 17:21:06
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

第二个氨基酸的突变,要看你的第二个氨基酸是否于蛋白的结构形成关系大不大!
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9楼2009-01-06 17:24:39
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