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Wendymia

新虫 (初入文坛)

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[求助] 【求助】ISSR-PCR用的takara的ex酶优化体系，扩成这样是体系浓度太高了么

PCR新手一枚，最近在做ISSR体系优化。跑成这样是体系浓度过高的原因吗？引物是国际通用引物，
引物序列：TCTCTCTCTCTCTCTCGT，
Taq，2U,
dNTPs mix(2.5mM),2.5ul
Mg2+(25mM),1.0/1.5/2.0/2.5ul
引物(12.5uM),1.0/2.0/3.0/4.0ul
DNA5ng
PCR程序

PCR程序优化
预变性 94/3min
变性 94/1min
退火 45
延伸 72/2min
循环 35
延伸 72/10min

Taq酶购自Takara公司的，
顺便想问一下，在过程中有时候跑得出条带，有时候又跑不出基本都涉及哪些原因？
求大神解答，感激不尽