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新虫 (初入文坛)

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[求助] 【求助】铁皮石斛甘露糖的含量测定（2015版药典）已有3人参与

求助！关于铁皮石斛的甘露糖测定，按照药典2015版方法进样测定后，发现对照品中甘露糖和PMP的峰没有分开，出现一个响应值达到3000的怪峰，一个叉很大的峰，供试品和葡萄糖对照品一样如此，究竟是什么问题呢？

我的液相是岛津LC-15C，色谱柱是依利特的C18色谱柱，柱温30度，进样量是10μl，之后将进样量调成5μl，依然是得到同样的峰。

是否因为前处理哪里的问题呢？是否PMP与单糖未发生衍生反应？但已经按药典重复操作3、4了。

希望大家帮帮忙，万分感谢~！

中国药典中铁皮石斛甘露糖含量测定方法：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02mol/L的乙酸铵溶液（20：80）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘露糖峰计算应不低于4000。
校正因子测定取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1ml含12mg的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取400μl，加0.5mol/L的PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μl，混匀，70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μl，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2ml，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液10μl，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。
测定法取本品粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇适量，加热回流提取4小时，弃去乙醇液，药淹挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水100ml，再精密加入内标溶液2ml，煎煮小时并时时搅拌，放冷，加水补至约100ml，混匀，离心，吸取上清液1ml，置安瓿瓶或顶空瓶中，加3.0mol/L的盐酸溶液0.5ml，封口，混匀，110℃水解1小时，放冷，用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，吸取400μl，照校正因子测定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。

图谱.jpg

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