| 查看: 3265 | 回复: 6 | ||
[求助]
CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带 已有1人参与
|
|
求助大家，我用的这个protocol从人体拭子中提取总DNA，我和我同学每个人分别提了一次，都跑不出条带，不知道该怎么办。是protcol有问题吗？定量结果我忘记拍了，浓度基本几十ng/ul作用，260/280也不好，小于1.8，肯定是有污染，但是不至于跑不出条带吧，希望有大神指出问题。这两天我也会再做一次加蛋白酶k看看如何 下面是我们用的protocol 1) 样品：吸取1000ul CTAB 裂解液（65℃预热）至2.0ml EP 管里，加入溶菌酶10ul，将适量的样品加入裂解液中，65 度水浴，期间颠倒混匀数次，以使样品充分裂解。 2) 低温12000rpm离心5min，离心取上清，加等量酚（Ph8.0）：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，12000rpm离心10min。 3) 取上清，加等量氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀，12000rpm 离心10min。 4) 吸取上清至1.5mL 离心管里，加入异丙醇，上下摇晃，-20 度沉淀。 5) 12000rpm 离心10 分钟，倒出液体，注意不要倒出沉淀。用1ml 75％乙醇洗 涤2 次，剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出。 6) 超净工作台吹干或者室温晾干（DNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解） 7) 加入ddH2O 溶解DNA 样品，必要时可于55-60?C 下孵育10min 助溶。 8) 加RNase A 1ul 消化RNA，37 度放置15min。  发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有88人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
2楼2017-04-19 23:56:52
3楼2017-04-19 23:57:54
New soul
至尊木虫 (文坛精英)
yyyyy
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 10645.4
- 散金: 5126
- 红花: 138
- 沙发: 546
- 帖子: 15176
- 在线: 1267.3小时
- 虫号: 4264339
- 注册: 2015-12-03
- 专业: 教育学其他学科
4楼2017-04-20 00:24:01
5楼2017-07-20 10:26:00
elmanbio
金虫 (小有名气)
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 1058.2
- 散金: 71
- 红花: 7
- 帖子: 255
- 在线: 152.3小时
- 虫号: 7000480
- 注册: 2017-07-28
- 专业: 人类遗传学
6楼2017-08-22 15:11:32
7楼2018-09-26 17:06:15