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[求助]
CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带 已有1人参与
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求助大家，我用的这个protocol从人体拭子中提取总DNA，我和我同学每个人分别提了一次，都跑不出条带，不知道该怎么办。是protcol有问题吗？定量结果我忘记拍了，浓度基本几十ng/ul作用，260/280也不好，小于1.8，肯定是有污染，但是不至于跑不出条带吧，希望有大神指出问题。这两天我也会再做一次加蛋白酶k看看如何 下面是我们用的protocol 1) 样品：吸取1000ul CTAB 裂解液（65℃预热）至2.0ml EP 管里，加入溶菌酶10ul，将适量的样品加入裂解液中，65 度水浴，期间颠倒混匀数次，以使样品充分裂解。 2) 低温12000rpm离心5min，离心取上清，加等量酚（Ph8.0）：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，12000rpm离心10min。 3) 取上清，加等量氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀，12000rpm 离心10min。 4) 吸取上清至1.5mL 离心管里，加入异丙醇，上下摇晃，-20 度沉淀。 5) 12000rpm 离心10 分钟，倒出液体，注意不要倒出沉淀。用1ml 75％乙醇洗 涤2 次，剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出。 6) 超净工作台吹干或者室温晾干（DNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解） 7) 加入ddH2O 溶解DNA 样品，必要时可于55-60?C 下孵育10min 助溶。 8) 加RNase A 1ul 消化RNA，37 度放置15min。  发自小木虫IOS客户端 |
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