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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带
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女少年93

新虫 (初入文坛)

[求助] CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带 已有1人参与

求助大家，我用的这个protocol从人体拭子中提取总DNA，我和我同学每个人分别提了一次，都跑不出条带，不知道该怎么办。是protcol有问题吗？定量结果我忘记拍了，浓度基本几十ng/ul作用，260/280也不好，小于1.8，肯定是有污染，但是不至于跑不出条带吧，希望有大神指出问题。这两天我也会再做一次加蛋白酶k看看如何

下面是我们用的protocol


1) 样品：吸取1000ul CTAB 裂解液（65℃预热）至2.0ml EP 管里，加入溶菌酶10ul，将适量的样品加入裂解液中，65 度水浴，期间颠倒混匀数次，以使样品充分裂解。
2) 低温12000rpm离心5min，离心取上清，加等量酚（Ph8.0）：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，12000rpm离心10min。
3) 取上清，加等量氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀，12000rpm 离心10min。
4) 吸取上清至1.5mL 离心管里，加入异丙醇，上下摇晃，-20 度沉淀。
5) 12000rpm 离心10 分钟，倒出液体，注意不要倒出沉淀。用1ml 75％乙醇洗
涤2 次，剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出。
6) 超净工作台吹干或者室温晾干（DNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解）
7) 加入ddH2O 溶解DNA 样品，必要时可于55-60?C 下孵育10min 助溶。
8) 加RNase A 1ul 消化RNA，37 度放置15min。

CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带


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1楼 2017-04-19 23:53:13
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女少年93

新虫 (初入文坛)
CTAB法从人体拭子中提取总DNA，跑不出条带-1

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2楼2017-04-19 23:56:52
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女少年93

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 女少年93 at 2017-04-19 23:56:52

是这张，上面那张糊掉了，我在中间三个孔加了样，都没有显影

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3楼2017-04-19 23:57:54
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New soul

至尊木虫 (文坛精英)

yyyyy
额，我提的微生物嗯DNA

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勤思乐创
4楼2017-04-20 00:24:01
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上官雨昕

新虫 (初入文坛)
有可能不小心倒掉了，不过建议RNA酶不要最后加，可能增加蛋白污染

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5楼2017-07-20 10:26:00
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elmanbio

金虫 (小有名气)
你好，我以前做过人样本基因组提取，你可以加一下QQ，具体问题我们相互了解一下！2488328082，看看是否可以帮你解决问题！
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6楼2017-08-22 15:11:32
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cxkhhh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们实验室用biog的拭子DNA提取试剂盒，觉得挺好用的操作便利，提取纯度高，产量也大，楼主可以试试。
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7楼2018-09-26 17:06:15
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