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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 半乳糖诱导高表达一个基因，目的菌株在平板上没有表型
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出芽酵母君

新虫 (初入文坛)

[求助] 半乳糖诱导高表达一个基因，目的菌株在平板上没有表型 已有2人参与

设计了一个半乳糖诱导一个基因高表达的载体，整合到了酿酒酵母的基因组里。然后将目的菌株梯度稀释后点在加有半乳糖的YP平板上。其他的课题组做出的表型很明显，在加有半乳糖的YP平板上目的菌株应该一点都不生长，野生型生长的很好。我的工作应该是重复出这个结果，但是不知道哪里有问题，目的菌株和野生型在加有半乳糖的YP平板上生长的一样好。我尝试过把酵母浸粉和蛋白胨替换成酵母氮源的培养基，完全剔除了葡萄糖的影响，但是表型还是一样的。求助大神，救我于水火。

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1楼 2017-04-19 17:19:36
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出芽酵母君

新虫 (初入文坛)
顺便加一句，正在尝试不同品牌的半乳糖，现在使用的是Amresco的半乳糖，还有一个国产的不知道什么牌子的半乳糖，都不好用。正在订sigma的半乳糖，还没有到。

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2楼2017-04-19 17:26:28
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
有可能蛋白未表达，或表达的非目的蛋白。检查一下表达载体序列是否错误，还可以WB分析一下

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

出芽酵母君
做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2017-04-20 00:30:26
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出芽酵母君

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 00:30:26
有可能蛋白未表达，或表达的非目的蛋白。检查一下表达载体序列是否错误，还可以WB分析一下

菌株已经WB分析了，没有问题。在加半乳糖之前蛋白不表达，加入半乳糖诱导后，蛋白表达。

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4楼2017-04-25 07:18:10
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

不知道你的表型筛选原理是什么，两种可能。
1. 你的蛋白随表达了但是无你想要的活性。
2. 培养基里某些成分某种程度上克服了你的蛋白表达带来的阻遏效应。
可以试试换合成培养基。
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5楼2017-04-26 10:55:22
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能是琼脂里有半乳糖，推荐看《从纯化到星辰》里有提到。
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6楼2017-04-27 15:41:09
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出芽酵母君

新虫 (初入文坛)
嗯嗯，谢谢大家的关注。问题已经解决了，是试剂的问题。国产的试剂质量没有保障，换成了国外的全套培养基试剂后问题就解决了。

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7楼2017-07-28 08:15:22
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tyxh111

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 出芽酵母君 at 2017-07-28 08:15:22
嗯嗯，谢谢大家的关注。问题已经解决了，是试剂的问题。国产的试剂质量没有保障，换成了国外的全套培养基试剂后问题就解决了。

是培养基加2%半乳糖，120度30min灭菌吗
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8楼2017-11-16 10:22:16
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silence0919

新虫 (小有名气)
请问楼主用半乳糖诱导大概怎么操作的，我用BY4741和质粒诱导表达蛋白，但是空载体和实验组诱导以后破菌SDS-PAGE看不出来差别~没有诱导成功。能否请教下楼主半乳糖诱导是怎么做的？
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9楼2018-09-18 21:53:33
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