24小时热门版块排行榜    

查看: 1426  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

出芽酵母君

新虫 (初入文坛)

[求助] 半乳糖诱导高表达一个基因,目的菌株在平板上没有表型已有2人参与

设计了一个半乳糖诱导一个基因高表达的载体,整合到了酿酒酵母的基因组里。然后将目的菌株梯度稀释后点在加有半乳糖的YP平板上。其他的课题组做出的表型很明显,在加有半乳糖的YP平板上目的菌株应该一点都不生长,野生型生长的很好。我的工作应该是重复出这个结果,但是不知道哪里有问题,目的菌株和野生型在加有半乳糖的YP平板上生长的一样好。我尝试过把酵母浸粉和蛋白胨替换成酵母氮源的培养基,完全剔除了葡萄糖的影响,但是表型还是一样的。求助大神,救我于水火。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能是琼脂里有半乳糖,推荐看《从纯化到星辰》里有提到。
6楼2017-04-27 15:41:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

出芽酵母君

新虫 (初入文坛)

顺便加一句,正在尝试不同品牌的半乳糖,现在使用的是Amresco的半乳糖,还有一个国产的不知道什么牌子的半乳糖,都不好用。正在订sigma的半乳糖,还没有到。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-04-19 17:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

有可能蛋白未表达,或表达的非目的蛋白。检查一下表达载体序列是否错误,还可以WB分析一下

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2017-04-20 00:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

出芽酵母君

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 00:30:26
有可能蛋白未表达,或表达的非目的蛋白。检查一下表达载体序列是否错误,还可以WB分析一下

菌株已经WB分析了,没有问题。在加半乳糖之前蛋白不表达,加入半乳糖诱导后,蛋白表达。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-04-25 07:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见