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804371539实习版主
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[求助]
荧光定量PCR做反应效率问题，质粒做模板
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求助！ 投稿了SCI，编辑说荧光定量要做目的基因和内参基因的扩增效率。 老师说模板要稀释10倍，做五个梯度，可是担心cDNA的效果不好，让我做克隆，用质粒来做模板， 我用荧光定量的目的基因和内参基因的引物做了PCR，切胶回收连接转化到DH5α大肠杆菌中，下一步做菌液提质粒。 这个步骤对吗？ 还有，荧光定量的时候是不是内参基因用内参基因的质粒。目的基因用目的基因的质粒。 分别做他们的标准曲线，求目的和内参的扩增效率。可是扩增效率怎么算呀？ |
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其实用cDNA完全可以的，还不用担心你最后提到的那个模板问题，如果效果会不好说明你的引物就是不行。步骤：反转录好cDNA后，稀释10倍，100倍，1000倍等等，就可以画标准曲线了，扩增效率通过斜率算，具体的忘了。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-04-20 00:52:45
