| 查看: 1467 | 回复: 1 | ||
[求助]
荧光定量PCR做反应效率问题，质粒做模板
|
|
求助！ 投稿了SCI，编辑说荧光定量要做目的基因和内参基因的扩增效率。 老师说模板要稀释10倍，做五个梯度，可是担心cDNA的效果不好，让我做克隆，用质粒来做模板， 我用荧光定量的目的基因和内参基因的引物做了PCR，切胶回收连接转化到DH5α大肠杆菌中，下一步做菌液提质粒。 这个步骤对吗？ 还有，荧光定量的时候是不是内参基因用内参基因的质粒。目的基因用目的基因的质粒。 分别做他们的标准曲线，求目的和内参的扩增效率。可是扩增效率怎么算呀？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
mochenmi
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1504.3
- 散金: 29
- 帖子: 221
- 在线: 48.7小时
- 虫号: 1966704
- 注册: 2012-09-01
- 专业: 植物病理学
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:42:33
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:42:33
|
其实用cDNA完全可以的，还不用担心你最后提到的那个模板问题，如果效果会不好说明你的引物就是不行。步骤：反转录好cDNA后，稀释10倍，100倍，1000倍等等，就可以画标准曲线了，扩增效率通过斜率算，具体的忘了。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-04-20 00:52:45