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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 最近pcr遇到一些问题，求大能们指点一波
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344560673

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近pcr遇到一些问题，求大能们指点一波

我需要做的是融合pcr，之前也做过，用taq酶p的小片段，primerstar做的融合，没啥问题就做出来了，因为后续构建重组质粒出了些问题，只有一个融合片段正确，还有三个连上的不对，我就把东西扔了想从头再做一次，但是最近不知道怎么了，拿taq酶p小片段没啥问题，跑胶结果挺好的，但是用prierstar加p好的小片段做融合就是做不出来了，跑完胶就是个长白条，什么条带都没有……考虑到taq酶加a尾的问题，尝试了用primer酶去p小片段，但是总是p不出来，不知道哪里出了问题，希望对这方面有经验的，可以指导一下，实在不知道还能从哪找问题了……

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1楼 2017-04-16 23:49:55
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
race？

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2楼2017-04-17 00:18:12
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
考虑高保真酶是不是出问题了，可以尝试更换新酶，或者用taq酶做融合pcr看能否成功

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做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2017-04-17 01:07:03
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344560673

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2017-04-17 00:18:12
race？

只是普通的融合

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4楼2017-04-17 08:13:10
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344560673

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-17 01:07:03
考虑高保真酶是不是出问题了，可以尝试更换新酶，或者用taq酶做融合pcr看能否成功

应该问题不是出在酶上，我试过借别人的或者别的实验室的酶，也没出来，融合片段两千多，用taq酶不知道行不行了，以前一做就出来了，现在出不来，这是最烦的

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5楼2017-04-17 08:14:58
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
看看水是不是出了问题

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6楼2017-04-17 08:29:09
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344560673

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2017-04-17 08:29:09
看看水是不是出了问题

水的影响大嘛？我用的是师姐的无菌水，自己的用完了……

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7楼2017-04-17 08:33:13
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