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新虫 (初入文坛)

[求助] 最近pcr遇到一些问题,求大能们指点一波

我需要做的是融合pcr,之前也做过,用taq酶p的小片段,primerstar做的融合,没啥问题就做出来了,因为后续构建重组质粒出了些问题,只有一个融合片段正确,还有三个连上的不对,我就把东西扔了想从头再做一次,但是最近不知道怎么了,拿taq酶p小片段没啥问题,跑胶结果挺好的,但是用prierstar加p好的小片段做融合就是做不出来了,跑完胶就是个长白条,什么条带都没有……考虑到taq酶加a尾的问题,尝试了用primer酶去p小片段,但是总是p不出来,不知道哪里出了问题,希望对这方面有经验的,可以指导一下,实在不知道还能从哪找问题了……

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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

2楼2017-04-17 00:18:12
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

考虑高保真酶是不是出问题了,可以尝试更换新酶,或者用taq酶做融合pcr看能否成功

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做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2017-04-17 01:07:03
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344560673

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2017-04-17 00:18:12
race?

只是普通的融合

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4楼2017-04-17 08:13:10
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344560673

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-17 01:07:03
考虑高保真酶是不是出问题了,可以尝试更换新酶,或者用taq酶做融合pcr看能否成功

应该问题不是出在酶上,我试过借别人的或者别的实验室的酶,也没出来,融合片段两千多,用taq酶不知道行不行了,以前一做就出来了,现在出不来,这是最烦的

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5楼2017-04-17 08:14:58
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

6楼2017-04-17 08:29:09
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344560673

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2017-04-17 08:29:09
看看水是不是出了问题

水的影响大嘛?我用的是师姐的无菌水,自己的用完了……

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7楼2017-04-17 08:33:13
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