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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 凝胶柱分离顺序问题
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南方丙丁

铜虫 (小有名气)

[求助] 凝胶柱分离顺序问题 已有1人参与

蛋白分离纯化最后一步，打算用凝胶柱，手上有两个规格的柱子，一个分离范围在3000-70000，另一个在10000-600000，目标蛋白30000左右。想串联进行分离，我是先用分离范围在3000-70000，再用10000-600000呢？还是颠倒过来？求助啊，谢谢了~
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1楼 2017-04-15 18:19:11
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
目标蛋白30000。两个介质的最大排阻极限都大于30000。但是3000~70000的更合适，分辨率和效率更高。
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4楼2017-08-02 11:22:54
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南方丙丁: 金币+5 2017-04-18 09:27:29
先大后小，看上限，over

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-04-15 19:54:38
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ChemBeanGo

新虫 (小有名气)
从这两种填料的分离范围来看应该是GE的Superdex 75 (3kDa-70kDa)和Superdex 200 (10kDa-600kDa)，对于目标分子量在30kDa的蛋白而言，这两种填料都适合。但是具体还要根据分离的目的来定，Superdex 75对于17-44kDa分子量范围的蛋白具有更高的分辨率，而Superdex 200对于150kDa以上分子量的大蛋白分离度更高，所以如果是要去除蛋白二聚体或多聚体，那么应该选择Superdex 75；如果是需要置换缓冲液或脱盐，那么应该选择分离范围在更低分子量的填料，比如Sephadex G10、G25等产品。
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3楼2017-05-10 09:44:38
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