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安格洛

新虫 (初入文坛)

[求助] 微生物SEM 已有2人参与

有没有人做过SEM.不知能否给点意见,是这样的,我一直在做SEM,但是每次结果都不怎么好,每次都会出现菌体结团或被淹没,我的方法基本上现将菌体离心,在用超纯水清洗培养基等,在加入2.5%的戊二醛磷酸缓冲液进行固定2-4个小时,在用超纯水清洗里面的盐类物质几次,在用乙醇梯度脱水,最后用叔丁醇置换脱水,再干燥。但是每次拍出的样品菌体基本上是埋没在其中,并不分散,不知道大家能否愿意分享相关经验
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懒懒呢

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gc1016670506 at 2017-05-05 16:03:17
收集对数生长期的新鲜菌液,无菌水洗涤3次,置于2.5%戊二醛磷酸缓冲液(pH7.2)中,于4℃固定过夜;次日以0.15%的同一缓冲液冲洗;然后依次用40%、70%、90%和100%的乙醇分别脱水15 min;脱水后用醋酸戊脂置换乙醇; ...

楼主 分别脱水的步骤是?离心再加入?
6楼2017-07-19 11:13:24
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查看全部 7 个回答

郑丽君-CC

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
安格洛: 金币+1 2017-07-24 11:01:52
安格洛: 金币+1 2017-07-24 11:05:18
楼主是不是固定的时间太短了,而且离心完了他们不也就是堆积在一起了吗?
2楼2017-05-05 10:24:46
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gc1016670506

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
安格洛: 金币+5, 有帮助 2017-05-06 21:13:46
小冀-: 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2017-05-07 09:29:26
安格洛: 金币+2 2017-07-24 11:02:21
安格洛: 金币+5, 方法和我差不多,至少说明我没有偏离很远,可能是细节出了差错 2017-07-24 11:06:33
安格洛: 金币+9, 有帮助, 之前不知道怎么赏金币,抱歉了,真的很谢谢你的热心回复,科研路上不容易 2017-07-24 11:15:42
收集对数生长期的新鲜菌液,无菌水洗涤3次,置于2.5%戊二醛磷酸缓冲液(pH7.2)中,于4℃固定过夜;次日以0.15%的同一缓冲液冲洗;然后依次用40%、70%、90%和100%的乙醇分别脱水15 min;脱水后用醋酸戊脂置换乙醇;将上述样品于真空冷冻干燥机中干燥
3楼2017-05-05 16:03:17
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gc1016670506

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
安格洛: 金币+1 2017-07-24 11:02:39
安格洛: 金币+1, 没有尝试,不过谢谢你的建议 2017-07-24 11:07:09
醋酸戊脂可换成叔丁醇,菌体被埋起来也有可能是上镜前镀金过厚的影响。
4楼2017-05-05 16:04:40
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