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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于pet28a的宿主问题
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于pet28a的宿主问题

实验室现有JM109，DH5a,B21(DE3),TOP10等4种感受态细胞。按理说最好是用B21（DE3），但是其转化效果最差。推测酶切和连接都没有问题但就是长不出克隆。转化空载时用1ul的载体转100ul感受态可以长出50个左右的克隆。但连接产物就是不行。
想请教诸位的是，其他的几种感受态有哪一种可以比较近似地替代B21（DE3)？
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1楼 2009-01-03 21:44:04
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢
BL21是表达宿主,所以最好用这个
其他的都是用来克隆的
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2楼2009-01-04 00:16:29
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pinene3862

银虫 (正式写手)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):呵呵。谢谢！您转过DH5a？效果怎么样？
通常我们是连接后转DH5a这些菌株的感受态细胞，然后鉴定提质粒。用提取的质粒转BL21，做细菌表达。
这样效率高很多。
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3楼2009-01-04 08:51:11
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
请教 pinene3862，您用pET28a转过DH5a？效果如何？
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4楼2009-01-04 09:23:19
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shenzhicon

银虫 (初入文坛)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):呵呵，谢谢！
DH5a是克隆用的菌，拿pET28a转应该没问题的。我做过pET22b、pET30a还有pET41a，效果都很好的。pinene3862的方法我们实验室也一直在用，效率很高
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5楼2009-01-04 23:15:30
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):嗯哪，谢谢！
我的实验也是先克隆到JM109,然后在亚克隆到BL21的
因为pET载体的拷贝数比较低
不容易直接克隆到表达宿主中
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6楼2009-01-05 20:39:16
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
谢谢wolfebst 。收获不少
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7楼2009-01-05 22:28:21
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meizixijun

金虫 (小有名气)

也试试

我也遇到一样的情况，重组质粒在BL21中怎么都转化不出。谢谢指教，我也回去试试。
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追求梦想，快乐着我的快乐
8楼2009-06-05 15:30:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
基因操作在DH5里面做（酶连物转化）
然后再提质粒，转BL21 一般都这么做比较好
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
9楼2009-06-05 16:44:07
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2008207380

金虫 (小有名气)
我们实验室也在用pET28a 也是先在DH5α里扩增重组质粒 然后在转到DE3中表达的
如果BL21不行的话 lz可以试试Tuner（DE3）
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10楼2009-06-05 19:27:22
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