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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于pet28a的宿主问题

实验室现有JM109,DH5a,B21(DE3),TOP10等4种感受态细胞。按理说最好是用B21(DE3),但是其转化效果最差。推测酶切和连接都没有问题但就是长不出克隆。转化空载时用1ul的载体转100ul感受态可以长出50个左右的克隆。但连接产物就是不行。
想请教诸位的是,其他的几种感受态有哪一种可以比较近似地替代B21(DE3)?
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shenzhicon

银虫 (初入文坛)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):呵呵,谢谢!
DH5a是克隆用的菌,拿pET28a转应该没问题的。我做过pET22b、pET30a还有pET41a,效果都很好的。pinene3862的方法我们实验室也一直在用,效率很高
5楼2009-01-04 23:15:30
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢
BL21是表达宿主,所以最好用这个
其他的都是用来克隆的
2楼2009-01-04 00:16:29
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pinene3862

银虫 (正式写手)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):呵呵。谢谢!您转过DH5a?效果怎么样?
通常我们是连接后转DH5a这些菌株的感受态细胞,然后鉴定提质粒。用提取的质粒转BL21,做细菌表达。
这样效率高很多。
3楼2009-01-04 08:51:11
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

请教 pinene3862,您用pET28a转过DH5a?效果如何?
4楼2009-01-04 09:23:19
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