应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于pet28a的宿主问题
202/2返回列表上一页12
查看: 2488  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xuehu2008 的 1 个金币

cpu2004

金虫 (小有名气)
我做实验的时候基本上是直接转化到BL21的，用CaCl2做感受态的时候过夜，5%转接2h，下面一样，感受效率挺高的。当然，我这样做的时候插入序列最长只有1700bp。其它大片段我还是用克隆+亚克隆的方法做的。

[ Last edited by cpu2004 on 2009-6-5 at 22:17 ]
赞一下 回复此楼
11楼2009-06-05 22:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)
先把pET28a转到DH5a里面，质粒鉴定无误后抽提质粒再转BL21表达蛋白
赞一下 回复此楼
12楼2009-06-06 15:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stfo

铜虫 (小有名气)
一般是先转DH5a，不要先转BL21，不太好的，呵呵
赞一下 回复此楼
13楼2009-06-06 15:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008116068

木虫 (著名写手)
我们实验室一般用DH5a，效果还不错，不过操作也比较重要
赞一下 回复此楼
只要踮起脚尖，就离太阳更近一点！！！
14楼2009-06-06 16:16:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
p28a和bl21（DE3）是我们实验室常用的表达载体和宿主菌，感觉重组p28转化BL21（de3）效果还是很好的。
如果你的感受态不是买的而是以前做的保存下来的，建议自己重新做感受态试试，一般做好感受态4度保存8-10小时后转化效果最好。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
15楼2009-06-06 17:26:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
你做完连接一定要先转化克隆菌，不要直接转表达菌，很难长出来。在克隆菌中鉴定阅读框正确后在转化表达菌。
虽然使用的pET28a同时拥有T7启动子和lac双重控制，但是还是会有些本底表达，因为平常使用的蛋白胨中都还有及少量的乳糖，这样就会开启启动子，是目的基因表达。这样细胞很有可能受不了。
而你使用质粒转化转化效率要比连接产物高很多。
曾经我想过要在培养基中加入0.5%的葡萄糖抑制本底表达，这样连接产物直接转表达菌可能会长出来，只是想过还未验证过。
赞一下 回复此楼
16楼2009-06-07 10:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
刚刚看到楼主是生物物理学，是不是在生物物理所？
我在！

[ Last edited by 月月大可 on 2009-6-7 at 11:01 ]
赞一下 回复此楼
17楼2009-06-07 10:59:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
先转到JM109，DH5a中，再大量提质粒，再转到B21中。实验室转农杆菌也是这种方法。
赞一下 回复此楼
18楼2009-06-07 12:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xieyue2005

新虫 (初入文坛)
我们实验室也是先将连接产物转入DH5a，再抽取阳性克隆菌质粒转BL21，使用表达载体PET32a，效果较好。
赞一下 回复此楼
19楼2009-06-08 00:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xieyue2005

新虫 (初入文坛)
你将构建好的表达载体先转入DH5a，然后提取质粒再做一下PCR和酶切鉴定，若效果都好，那你再转BL21，因为BL21是pet系列表达载体最好的表达宿主菌。
赞一下 回复此楼
20楼2009-11-14 18:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuehu2008 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 263求调剂 +5 yqdszhdap－ 2026-03-22 5/250 2026-03-23 10:23 by 呆呆师姐
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +5 材料学257求调剂 2026-03-23 6/300 2026-03-23 10:19 by 呆呆师姐
[考研] 08工学调剂 +6 用户573181 2026-03-20 9/450 2026-03-23 10:08 by 汪！？！
[考研] 306求调剂 +7 chuanzhu川烛 2026-03-18 7/350 2026-03-23 09:22 by king123！
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭